Инструкция к набору для мечения клеточных мембран красителем PKH26
Состав набора
Компонент набора | Количество | ||||
---|---|---|---|---|---|
13201 100 uL dye, 1x buffer |
23201 100 uL dye, 5x buffer |
33201 500 uL dye, 1x buffer |
43201 500 uL dye, 5x buffer |
||
2484-100uL, PKH26 dye, 1 mM solution in isopropanol, 100 uL | 1 | 1 | 5 | 5 | |
K6150, PKH26 Diluent, 1x, 10 mL | 5 | — | 25 | — | |
K7150, PKH26 Diluent, 5x, 10 mL | — | 1 | — | 5 |
Хранить при +4 °С. Прогреть до +20 °С перед использованием.
Срок хранения 12 месяцев.
Рекомендации по использованию набора
- В зависимости от типа клеток и эксперимента оптимальные концентрации красителя и клеток могут отличаться, поэтому рекомендуется оценивать жизнеспособность клеток, гомогенность и интенсивность флуоресценции после окрашивания.
- Не используйте растворы, содержащие азиды, при окрашивании красителем PKH26.
- Более однородное окрашивание достигается при использовании суспензии клеток.
Протокол
Протокол использования набора для мечения клеточных мембран красителем PKH26 на примере адгезионной культуры RAW264.7, 1×10^6 клеток в образце, финальная концентрация PKH26 — 2 мкМ, финальный объем 200 мкл.
- Непосредственно перед окрашиванием приготовьте раствор PKH26. Добавьте 1 мкл 1 мМ раствора PKH26 к 9 мкл 96% этанола, и 4 мкл полученного раствора добавьте к 100 мкл PKH26 Diluent, 1x.
- Культуру клеток снимите с подложки скребком в растворе Хенкса (HBSS). Проведите подсчет клеток в образце. Далее добавьте 3 мл раствора Хенкса, центрифугируйте при 400 g 6 мин при комнатной температуре. *Сывороточные белки и липиды также связывают краситель, поэтому рекомендуется однократно промывать клетки бессывороточной средой или фосфатно-солевым буфером.
- Супернатант удалите полностью пипеткой, необходимое количество клеток (например, 10^6 клеток) ресуспендируйте в 100 мкл PKH26 Diluent, 1x. Далее добавьте 100 мкл полученного на первом шаге раствора PKH26. Пипетируйте и оставьте при комнатной температуре на 5 мин. Конечная концентрация PKH26 в растворе с клетками — 2 мкМ. *Для воспроизводимых результатов важно минимизировать количество супернатанта перед ресуспендированием клеток. *Не оставляйте клетки в PKH26 Diluent в течение длительного времени. *Поскольку окрашивание происходит практически мгновенно, быстрое диспергирование клеток в растворе красителя имеет важное значение для яркого, однородного и воспроизводимого мечения.
- Добавьте 2 мл фетальной бычьей сыворотки для остановки реакции, инкубируйте 1 мин. Центрифугируйте при 400 g 10 мин при комнатной температуре. *Не используйте для остановки реакции бессывороточную среду или буферные растворы, которые вызывают образование агрегатов красителя.
- Супернатант удалите, ресуспендируйте клетки в 5 мл полной питательной среды, перенесите в новую пробирку. Отберите аликвоты для оценки жизнеспособности трипановым синим. Центрифугируйте при 400 g 10 мин при комнатной температуре.
- Ресуспендируйте клетки в буфере, необходимом для дальнейшего анализа (микроскопия, проточная цитофлуориметрия и др.). *Окрашенные клетки можно фиксировать 2% параформальдегидом, и окраска остается стабильной в течение не менее 3 недель, если образцы защищены от света.
Рекомендации по хранению:
Раствор красителя PKH26 можно хранить при комнатной температуре или в холодильнике в защищенном от света месте. Рекомендуется проверить раствор на наличие осадка перед использованием. Если в растворе красителя заметен осадок, слегка нагрейте его на водяной бане при 37°C и обработайте ультразвуком или встряхните до повторного растворения.
Раствор PKH26 Diluent поставляется в виде однократного либо пятикратного раствора в стерильной емкости, его рекомендуется хранить в холодильнике и доводить до комнатной температуры непосредственно перед использованием.
Наборы
Набор для мечения клеточных мембран красителем PKH26
Набор содержит раствор красителя PKH26, который способен окрашивать мембраны клеток.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
13201 |
100 uL dye, 1x buffer
|
$190.00 | 7 д | |
23201 |
100 uL dye, 5x buffer
|
$140.00 | 7 д | |
33201 |
500 uL dye, 1x buffer
|
$790.00
|
7 д | |
43201 |
500 uL dye, 5x buffer
|
$720.00
|
7 д |
