Инструкция к набору для мечения клеточных мембран красителем PKH26

Состав набора

Компонент набора Количество
13201
100 uL dye, 1x buffer
23201
100 uL dye, 5x buffer
33201
500 uL dye, 1x buffer
43201
500 uL dye, 5x buffer
2484-100uL, PKH26 dye, 1 mM solution in isopropanol, 100 uL 1 1 5 5
K6150, PKH26 Diluent, 1x, 10 mL 5 25
K7150, PKH26 Diluent, 5x, 10 mL 1 5

Хранить при +4 °С. Прогреть до +20 °С перед использованием.

Срок хранения 12 месяцев.

Рекомендации по использованию набора

  • В зависимости от типа клеток и эксперимента оптимальные концентрации красителя и клеток могут отличаться, поэтому рекомендуется оценивать жизнеспособность клеток, гомогенность и интенсивность флуоресценции после окрашивания.
  • Не используйте растворы, содержащие азиды, при окрашивании красителем PKH26.
  • Более однородное окрашивание достигается при использовании суспензии клеток.

Протокол

Протокол использования набора для мечения клеточных мембран красителем PKH26 на примере адгезионной культуры RAW264.7, 1×10^6 клеток в образце, финальная концентрация PKH26 — 2 мкМ, финальный объем 200 мкл.

  1. Непосредственно перед окрашиванием приготовьте раствор PKH26. Добавьте 1 мкл 1 мМ раствора PKH26 к 9 мкл 96% этанола, и 4 мкл полученного раствора добавьте к 100 мкл PKH26 Diluent, 1x.
  2. Культуру клеток снимите с подложки скребком в растворе Хенкса (HBSS). Проведите подсчет клеток в образце. Далее добавьте 3 мл раствора Хенкса, центрифугируйте при 400 g 6 мин при комнатной температуре.
    *Сывороточные белки и липиды также связывают краситель, поэтому рекомендуется однократно промывать клетки бессывороточной средой или фосфатно-солевым буфером.
  3. Супернатант удалите полностью пипеткой, необходимое количество клеток (например, 10^6 клеток) ресуспендируйте в 100 мкл PKH26 Diluent, 1x. Далее добавьте 100 мкл полученного на первом шаге раствора PKH26. Пипетируйте и оставьте при комнатной температуре на 5 мин. Конечная концентрация PKH26 в растворе с клетками — 2 мкМ.
    *Для воспроизводимых результатов важно минимизировать количество супернатанта перед ресуспендированием клеток.
    *Не оставляйте клетки в PKH26 Diluent в течение длительного времени.
    *Поскольку окрашивание происходит практически мгновенно, быстрое диспергирование клеток в растворе красителя имеет важное значение для яркого, однородного и воспроизводимого мечения.
  4. Добавьте 2 мл фетальной бычьей сыворотки для остановки реакции, инкубируйте 1 мин. Центрифугируйте при 400 g 10 мин при комнатной температуре.
    *Не используйте для остановки реакции бессывороточную среду или буферные растворы, которые вызывают образование агрегатов красителя.
  5. Супернатант удалите, ресуспендируйте клетки в 5 мл полной питательной среды, перенесите в новую пробирку. Отберите аликвоты для оценки жизнеспособности трипановым синим. Центрифугируйте при 400 g 10 мин при комнатной температуре.
  6. Ресуспендируйте клетки в буфере, необходимом для дальнейшего анализа (микроскопия, проточная цитофлуориметрия и др.).
    *Окрашенные клетки можно фиксировать 2% параформальдегидом, и окраска остается стабильной в течение не менее 3 недель, если образцы защищены от света.

Рекомендации по хранению:

Раствор красителя PKH26 можно хранить при комнатной температуре или в холодильнике в защищенном от света месте. Рекомендуется проверить раствор на наличие осадка перед использованием. Если в растворе красителя заметен осадок, слегка нагрейте его на водяной бане при 37°C и обработайте ультразвуком или встряхните до повторного растворения.

Раствор PKH26 Diluent поставляется в виде однократного либо пятикратного раствора в стерильной емкости, его рекомендуется хранить в холодильнике и доводить до комнатной температуры непосредственно перед использованием.

Наборы

Набор для мечения клеточных мембран красителем PKH26

Набор содержит раствор красителя PKH26, который способен окрашивать мембраны клеток.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13201 100 uL dye, 1x buffer $190.00 7 д
23201 100 uL dye, 5x buffer $140.00 7 д
33201 500 uL dye, 1x buffer $790.00 7 д
43201 500 uL dye, 5x buffer $720.00 7 д

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.