Окрашивание живых клеток флуоресцентным красителем для нуклеиновых кислот LUCS® 13

LUCS® 13 — проникающий в клетки ядерный краситель, имеющий яркую зеленую флуоресценцию при связывании с нуклеиновыми кислотами. LUCS® 13 используют для окрашивания РНК и ДНК как в живых, так и в мертвых эукариотических клетках, а также грамположительных и грамотрицательных бактерий. В отличие от DAPI и Hoechst 33342, LUCS 13 не является чисто ядерным красителем, и помимо окрашивания ядер, он также демонстрирует диффузное окрашивание цитоплазмы и митохондрий живых клеток.

Краситель может использоваться совместно с непроникающими в живые клетки ядерными маркерами, такими как YoDi-3, для оценки клеточной выживаемости методами флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии.

Краситель возбуждается при 488 нм, эмиссия регистрируется во флуоресцеиновом канале с пиком 509 нм после связывания с ДНК и 514 нм после связывания с РНК.

LUCS® 13 является полным структурным аналогом SYTO®13.

Протокол

Точный протокол зависит от конкретного типа клеток и экспериментальной задачи. В общем он может быть описан следующим образом:

  1. Приготовьте 50 мкМ стоковый раствор LUCS® 13. Для этого к 10 мкл 5 мМ раствора LUCS® 13 добавьте 990 мкл деионизованной воды. Стоковый раствор можно разаликвотить и заморозить для длительного хранения.
  2. Для приготовления рабочего 1 мкМ раствора LUCS® 13 добавьте 20 мкл 50 мкМ стока LUCS® 13 в 980 мкл PBS.
  3. Адгезированные клетки аккуратно снимите с поверхности роста подходящим способом. С суспензионными клетками начинайте работу со следующего пункта.
  4. Промойте клетки один раз охлаждённым PBS (рН7.4). Осадите клетки центрифугированием 5 мин при 300 g.
  5. Инкубируйте клетки в 1 мл 1 мкМ рабочего раствора LUCS® 13 в течение 30 мин при 37°С.
  6. Удалите раствор красителя центрифугированием 5 мин при 300 g.
  7. Отмойте клетки однократно с помощью PBS.
  8. (Опционально) При необходимости клетки можно зафиксировать в 3,7% растворе формальдегида в PBS в течение 15 мин, отмыть PBS и докрасить другим красителем.

Важно

  • Используйте пластиковые пробирки при работе с растворами LUCS® 13, поскольку разведенный краситель может прилипать к стеклу.
  • Более яркое окрашивание может быть получено с буферами, не содержащими фосфатов (например, 15 мМ HEPES в физиологическом растворе).
  • Перед началом эксперимента протестируйте несколько концентраций красителя в диапазоне от 10 нМ до 5 мкМ, чтобы определить наиболее оптимальное разведение красителя. На результат окрашивания влияет ряд факторов: среда для выращивания, плотность клеток, наличие других типов клеток, длительность окрашивания и др.
SYTO® — торговая марка Molecular Probes Inc. в некоторых странах.

Похожие товары

LUCS® 13, зеленый флуоресцентный краситель для нуклеиновых кислот

Яркий зеленый флуоресцентный краситель, проникающий в живые клетки и окрашивающий нуклеиновые кислоты в них.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
14010 50 uL, 5 mM/DMSO $110 в наличии
24010 250 uL, 5 mM/DMSO $250 в наличии
44010 1 mL, 5 mM/DMSO $750 в наличии
Оптовый заказ
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!
Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.