Калькулятор мечения белков активированными NHS эфирами

1. Mw белка составляет Da

Молекулярная масса белка. Например, Mw IgG-антител составляет 150000

Молекулярная масса белка должна быть числом, большим или равным 100.

2. Выберите метку
или укажите молекулярную массу метки: Da

Молекулярная масса метки представлена на странице продукта.

Молекулярная масса метки должна быть числом, большим или равным 100.

3. Метка берется в многократном избытке. Укажите кратность избытка

Флуорофор для мечения берется в избытке по отношению к реакционноспособным группам белка. Чем больше взято флуорофора, тем большее среднее число молекул метки на одну молекулу белка будет получено в конъюгате. Точная взаимная зависимость этих параметров всегда разная для различных белков и флуорофоров, но в среднем при 8-кратном избытке можно ожидать от 1 до 3 молекул флуорофора на молекулу белка.

Кратность избытка должна быть числом в диапазоне от 0,1 до 50 000.

4. Белок для конъюгации находится в

Выберите в какой форме находится ваш белок - в растворе или твердом состоянии.

5. Масса белка составляет mg

Масса белка должна быть числом, большим или равным 0.01.

5. У меня растворено mg белка в mL раствора, и я собираюсь использовать uL этого раствора для реакции.

Раствор не должен содержать компонентов, которые реагируют с флуорофором. Например, активированные эфиры N-гидроксисукцинимида реагируют с первичными аминами (в некоторой степени они устойчивы к компонентам Tris буфера), а малеимиды реагируют с тиольными группами (DTT и меркаптоэтанол). Этих компонентов следует избегать. Если они присутствуют, их необходимо удалить перед мечением диализом или гель-фильтрацией.

Значение количества белка должно быть числом, которое может быть равным или находиться в диапазоне от 0,01 до 5000.

Значение в mL должно быть числом, которое может быть равным или находиться в диапазоне от 0,001 до 50,000.

Значение в uL должно быть числом, которое может быть равным или находиться в диапазоне от 1 до 50,000,000.

Концентрация белка в растворе слишком низкая.

Дополнительные возможности

Содержание органического растворителя (ДМФА/ДМСО) в реакционной смеси %

Органический растворитель должен присутствовать в реакционной смеси при использовании гидрофобных флуорофоров, или если флуорофор необходимо разаликвотить (активированные эфиры и малеимиды нельзя хранить в водосодержащих растворах!). Некоторые особо чувствительные белки не переносят органических растворителей, но многие прекрасно совместимы с небольшими количествами ДМСО в водных растворах (допустимо до 10% ДМСО по объему).

Концентрация белка в реакционной смеси mg/mL

Выберите концентрацию белка, которую будете использовать в реакции. Оптимальное значение составляет 10 мг/мл. Более высокие концентрации ведут и к более эффективному использованию метки, однако некоторые белки плохо растворимы, и получить их концентрированные растворы, подходящие для реакции, не представляется возможным.