Инструкция к набору QuDye Protein для определения концентрации белка

Набор предназначен для определения концентрации белка на флуориметре Qubit™. Краситель QuDye Protein селективно связывается с мицеллами SDS-белок, в результате чего нуклеотиды, ДНК, РНК и другие примеси (но не детергенты), присутствующие в пробе, не оказывают влияния на результаты измерений. Набор QuDye Protein оптимизирован для проведения измерений на флуориметре Qubit™ в диапазоне исходной концентрации белка 12.5–5000 мкг/мл. Метод является высокочувствительным и универсальным, что обусловлено малыми колебаниями интенсивности флуоресценции при измерении концентрации различных белков. В состав набора включены все необходимые реагенты. Измерения с помощью набора QuDye Protein не требуют специальной пробоподготовки, в том числе предварительного прогрева при 95 °С. Все измерения проводятся при комнатной температуре и займут, в среднем, 30 минут для 5–10 исследуемых образцов.

Состав набора

Компонент набора Количество
15102
100 assays
25102
500 assays
15210, Краситель QuDye Protein / QuDye Protein reagent, 200x, 100 uL 3
55210, Краситель QuDye Protein / QuDye Protein reagent, 200x, 1.5 mL 1
S1750, Буфер QuDye Protein / QuDye Protein buffer, 1x, 50 mL 1 3
B3650, Стандарт #1 / Protein standard, 0 ng/uL, TE буфер, 1 mL 1 1
B4650, Стандарт #2 / Protein standard, БСА 200 ng/uL в TE буфере, 1 mL 1 1
B5650, Стандарт #3 / Protein standard, БСА 400 ng/uL в TE буфере, 1 mL 1 1

Хранить при температуре +4 °С. Прогреть до +20 °С перед использованием.

Срок хранения 12 месяцев.

! Все измерения с использованием набора QuDye Protein должны проводиться при комнатной температуре (22–28 °С). Перед началом работы прогрейте все используемые растворы до комнатной температуры. Избегайте нагрева образцов, так как результаты измерений зависят от температуры пробы; в частности, не держите в руках пробирки с образцами непосредственно перед измерениями на флуориметре.

Протокол

  1. Приготовьте рабочий раствор красителя QuDye Protein из расчета, что на каждый образец и на каждый из трёх стандартов потребуется около 200 мкл. Для этого разведите 200х концентрат красителя QuDye Protein в 200 раз буфером QuDye Protein.
    Например, для измерения 2 образцов и 3 стандартов необходимо приготовить 200 мкл x 5 = 1000 мкл рабочего раствора красителя (смешайте 5 мкл концентрата красителя QuDye Protein и 995 мкл буфера QuDye Protein).
    ! Рабочий раствор красителя рекомендуется использовать в течение нескольких часов после приготовления. При проведении отсроченных измерений рекомендуется беречь от света готовый рабочий раствор красителя.
    ! Для приготовления рабочего раствора красителя используйте только пластиковую посуду. Стеклянная посуда может сорбировать на своих стенках краситель, что приведет к снижению концентрации красителя в образцах и искажению результатов измерений.
  2. Подготовьте три тонкостенные, оптически прозрачные 0.5 мл пластиковые пробирки для стандартов и по одной пробирке для каждого измеряемого образца. Подпишите крышки пробирок (не делайте пометок на стенках пробирок, так как это может привести к некорректному определению интенсивности флуоресценции).
  3. Внесите в отдельные пробирки по 190 мкл рабочего раствора красителя QuDye Protein и по 10 мкл каждого из трех стандартов, поставляемых в наборе. Перемешайте на вортексе 2–3 секунды, сбросьте капли.
  4. Внесите в отдельные пробирки по 180–199 мкл рабочего раствора красителя QuDye Protein и по 20–1 мкл образца (конечный объём в каждой пробирке должен составить 200 мкл). Перемешайте на вортексе 2–3 секунды, сбросьте капли.
    Разведение исследуемого образца опционально и зависит от его исходной концентрации. Исходная концентрация образца должна соответствовать диапазону 12.5–5000 мкг/мл для измерений на флуориметре Qubit™. В то же время следует избегать использования маленьких объёмов при разбавлении исходного образца, поскольку неточность пипетирования маленьких объёмов может сказаться на результатах измерений.
  5. Инкубируйте все пробирки (содержащие стандарты и исследуемые образцы) 15 минут при комнатной температуре.
  6. Проведите измерение интенсивности флуоресценции.

Измерение интенсивности флуоресценции на флуориметре Qubit™

Следующие пункты следует выполнять согласно инструкции к флуориметру Qubit™. В зависимости от версии флуориметра пункты меню могут отличаться от приведенных ниже.

  1. После включения прибора выберите пункт «Quant – It Protein». Нажмите «Go».
  2. При каждом новом приготовлении рабочего раствора красителя следует проводить калибровку флуориметра. Выберете пункт «Run new calibration» и нажмите «Go».
  3. Поместите в гнездо пробирку, содержащую стандарт #1, закройте крышку, нажмите «Go». Когда прибор проведет измерение (около 3 сек), удалите пробирку со стандартом #1.
    Поместите в гнездо пробирку, содержащую стандарт #2, закройте крышку, нажмите «Go». Когда прибор проведет измерение, удалите пробирку со стандартом #2.
    Поместите в гнездо пробирку, содержащую стандарт #3, закройте крышку, нажмите «Go». Когда прибор проведет измерение, удалите пробирку со стандартом #3.
  4. После успешного завершения калибровки поместите в гнездо пробирку с экспериментальным образцом, закройте крышку, нажмите «Go». На экране прибор покажет значение QF Value.
    Рассчитайте концентрацию белка по формуле: Концентрация белка в образце = QF Value x 200/объем образца; или введите объем образца в прибор.

Наборы

Набор для определения количества белка на флуориметре Qubit®

Набор для точного и высокочувствительного определения концентрации белка на флуориметре Qubit®. Малочувствителен к примесям.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15102 100 assays $59.00 в наличии
25102 500 assays $199.00 в наличии

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.