Инструкция к набору LumiMag BB для выделения ДНК на на магнитных частицах из цельной крови и буккального эпителия

Набор предназначен для быстрого и высокоэффективного выделения геномной ДНК из цельной крови и соскобов эпителия на магнитных частицах. Он совместим с автоматическими рабочими станциями KingFisher™ Flex, MagMAX™ Express-96, KingFisher™ Duo Prime, KingFisher™ mL, а также подходит для ручного выделения ДНК с использованием магнитного штатива.

Полученная ДНК не содержит примесей белков, подходит для проведения ПЦР, обработки эндонуклеазами рестрикции, Саузерн-блоттинга, подготовки образцов для секвенирования по методу Сэнгера и NGS-секвенирования.

Состав набора

Необходимое оборудование и материалы, не входящие в состав набора:

• Автоматическая рабочая станция (KingFisher™ Flex, MagMAX™ Express-96, KingFisher™ Duo Prime, KingFisher™ mL) / магнитный штатив
• При использовании магнитного штатива: пробирки типа эппендорф объемом 1,5 мл (2 пробирки для выделения ДНК из 1 образца)
• 96% этанол
• Натрий-фосфатный буфер (PBS) для выделения ДНК из соскобов эпителия
• (опционально) шейкер для планшетов
• Расходный пластик при использовании автоматической рабочей станции:

Перед началом работы

1. Разбавьте концентрат промывочного раствора B в 5 раз 96% этанолом (к указанному на банке объему концентрата добавьте 4 объема 96% этанола), поставьте отметку о добавлении этанола на крышке.
2. Добавьте 1 мл буфера для растворения протеиназы К в пробирку с лиофилизованной протеиназой К, тщательно перемешайте, сбросьте капли центрифугированием.
   ! Раствор протеиназы К после приготовления хранить в морозилке при −20°С.
3. При наличии осадка в лизирующем растворе BB и промывочном растворе MAG А прогрейте их в термостате до температуры не выше +50°С и дождитесь полного растворения осадка.
4. В случае использования шейкера для планшетов, подберите оптимальные условия для эффективного перемешивания:
   • Убедитесь, что планшет плотно фиксируется в шейкере.
   • Добавьте в лунки планшета 1 мл воды и накройте планшет фольгой. Определите максимальную скорость шейкера, при которой вода из лунок не выплескивается на фольгу.

Подготовка образцов

Соскобы эпителия:

1. Добавьте в чистую 1,5 мл пробирку 1 мл PBS.
2. Тщательно промойте в PBS палочку с соскобом эпителия. Отрежьте верхнюю часть палочки, закройте пробирку.
3. Встряхните содержимое пробирки с помощью вортекса в течение 2-3 минут.
4. В качестве образца используйте 200 мкл супернатанта.

Цельная кровь: Тщательно перемешайте пробирку с кровью и используйте 200 мкл в качестве образца.

Выделение ДНК с использованием автоматической рабочей станции KingFisher™ Flex, MagMAX™ Express-96

1. Подготовьте планшеты для автоматической обработки образцов на приборе согласно таблице ниже.
   ! Заклейте адгезивной фольгой приготовленные планшеты с растворами до загрузки в прибор для предотвращения контаминации и испарения растворов.

ID планшета	Позиция планшета в приборе	Тип планшета	Реагент	Объем на лунку
Wash Plate 1	2	С глубокими лунками	Промывочный раствор MAG A	500 мкл
Wash Plate 2	3	С глубокими лунками	Промывочный раствор B	500 мкл
Elution	4	Стандартный	Элюирующий буфер	90 мкл
Tip Comb	5	Стандартный	Поместите гребенку наконечников в планшет

2. Тщательно ресуспендируйте суспензию магнитных частиц на вортексе.
3. В отдельной пробирке приготовьте смесь магнитных частиц с раствором протеиназы К по схеме: 30 мкл смеси на 1 образец = 20 мкл суспензии магнитных частиц + 10 мкл раствора протеиназы К.
4. Тщательно перемешайте смесь магнитных частиц и протеиназы К. Внесите по 30 мкл смеси в лунки планшета (с глубокими лунками).
5. Добавьте по 200 мкл образца цельной крови/соскоба эпителия (см. раздел Подготовка образцов) к смеси магнитных частиц и протеиназы К.
6. Тщательно перемешайте содержимое лунок планшета:
   • С использованием шейкера для планшетов 2 минуты при максимальных оборотах (предварительно определив максимальные обороты, см. раздел Перед началом работы),
   • ИЛИ
   • Пипетированием, после чего инкубируйте 2 минуты при комнатной температуре.
7. Добавьте в лунки по 700 мкл Лизирующего раствора BB.
8. Переходите к процедуре автоматической обработки образцов на приборе. Для этого выберите соответствующую программу на приборе и запустите ее.
   Используйте программу MagMAX_CORE:

Название прибора	Название программы с нагревом	Название программы без нагрева (опционально)
KingFisher™ Flex	MagMAX_CORE_Flex.bdz	MagMAX_CORE_Flex_no_heat.bdz
KingFisher™ 96 MagMAX™ Express-96	MagMAX_CORE_KF-96.bdz	MagMAX_CORE_KF-96_no_heat.bdz

9. Следуя указаниям прибора, поместите в прибор подготовленные планшеты с растворами (п.1) и с образцами (п.7).

Хранение выделенной ДНК: в морозильной камере (−20°С), кратковременно при +4°С.

Выделение ДНК с использованием автоматической рабочей станции KingFisher™ Duo Prime, KingFisher™ mL

1. Тщательно ресуспендируйте суспензию магнитных частиц на вортексе.
2. В отдельной пробирке приготовьте смесь магнитных частиц с раствором протеиназы К по схеме: 30 мкл смеси на 1 образец = 20 мкл суспензии магнитных частиц + 10 мкл раствора протеиназы К.
3. Тщательно перемешайте смесь магнитных частиц и протеиназы К. Внесите по 30 мкл смеси в лунки планшета/стрипа.
4. Добавьте по 200 мкл образца цельной крови/соскоба эпителия (см. раздел Подготовка образцов) к смеси магнитных частиц и протеиназы К.
5. Тщательно перемешайте содержимое лунок планшета/стрипа:
   • С использованием шейкера для планшетов 2 минуты при максимальных оборотах (предварительно определив максимальные обороты, см. раздел Перед началом работы),
   • ИЛИ
   • При работе со стрипами для KingFisher™ mL: пипетированием, после чего инкубируйте 2 минуты при комнатной температуре.
6. Добавьте в лунки по 700 мкл Лизирующего раствора BB.
7. Добавьте Промывочный раствор MAG A, Промывочный раствор B, Элюирующий буфер и образцы в соответствующие лунки планшета/стрипа согласно таблице ниже.
   Загружайте на прибор гребенки наконечников и приготовленные согласно таблице готовые планшеты/стрипы одновременно.

KingFisher™ Duo Prime
ID ряда	Ряд в планшете	Тип планшета	Реагент	Объем на лунку
Sample	A	С глубокими лунками	Образец (полученный в п.6)	930 мкл
Wash 1	B		Промывочный раствор MAG A	500 мкл
Wash 2	C		Промывочный раствор B	500 мкл
Elution	Отдельный стрип	Стрип для элюирования	Элюирующий буфер	90 мкл
Tip Comb	H	С глубокими лунками	Поместите гребенку наконечников в планшет

  

KingFisher™ mL
ID позиции	Позиция стрипа в приборе	Лунка	Реагент	Объем на лунку
Sample	1	Стандартная	Образец (полученный в п.6)	930 мкл
Wash 1	2		Промывочный раствор MAG A	500 мкл
Wash 2	3		Промывочный раствор B	500 мкл
Elution	4		Элюирующий буфер	90 мкл
Tip Comb	—	—	Поместите гребенку в держатель.

8. Переходите к процедуре автоматической обработки образцов на приборе. Для этого выберите соответствующую программу на инструменте и запустите ее.

Используйте программу MagMAX_CORE:

Название прибора	Название программы с нагревом	Название программы без нагрева
KingFisher™ Duo Prime	MagMAX_CORE_DUO.bdz	MagMAX_CORE_DUO_no_heat.bdz
KingFisher™ mL	—	MagMAX_CORE_mL_no_heat.bdz

Хранение выделенной ДНК: в морозильной камере (−20°С), кратковременно при +4°С.

Выделение ДНК с использованием магнитного штатива

1. Тщательно ресуспендируйте суспензию магнитных частиц на вортексе.
2. В отдельной пробирке приготовьте смесь магнитных частиц с раствором протеиназы К по схеме: 30 мкл смеси на 1 образец = 20 мкл магнитных частиц + 10 мкл раствора протеиназы К.
3. Тщательно перемешайте смесь магнитных частиц и протеиназы К. Внесите по 30 мкл смеси в отдельные пробирки, совместимые с магнитным штативом.
4. Добавьте по 200 мкл образца цельной крови/соскоба эпителия (см. раздел Подготовка образцов) в пробирку со смесью магнитных частиц и протеиназы К.
5. Тщательно перемешайте содержимое пробирки на вортексе. Инкубируйте 2 минуты при комнатной температуре.
6. Добавьте в каждую пробирку 700 мкл Лизирующего раствора BB. Тщательно перемешайте на вортексе.
7. Поместите пробирки в магнитный штатив. Подождите, пока магнитные частицы полностью перейдут в осадок. Тщательно удалите супернатант (например, с помощью дозатора).
8. Добавьте 500 мкл Промывочного раствора MAG A, тщательно перемешайте на вортексе или пипетированием. Поместите пробирки в магнитный штатив, после осаждения частиц удалите супернатант.
9. Добавьте 500 мкл Промывочного раствора B, тщательно перемешайте на вортексе или пипетированием. Поместите пробирки в магнитный штатив, после осаждения частиц удалите супернатант.
10. Добавьте 90 мкл Элюирующего буфера, тщательно перемешайте на вортексе или пипетированием. Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре. Поместите пробирки в магнитный штатив, после осаждения частиц супернатант содержит выделенную геномную ДНК. Перенесите супернатант в новую чистую пробирку.

Хранение выделенной ДНК: в морозильной камере (−20°С), кратковременно при +4°С.

Наборы

LumiMag BB, набор для выделения ДНК на на магнитных частицах из цельной крови и буккального эпителия

Набор на магнитных частицах для высокоэффективного выделения геномной ДНК из цельной крови и соскобов эпителия. Совместим с автоматическими рабочими станциями и ручным выделением с использованием магнитного штатива.

Показать цены

Спрятать цены

×

Ваше сообщение успешно отправлено.

×

Извините, ваш запрос не может быть обработан. Попробуйте выполнить его позже.

×

Имя*:

E-mail*:

Сообщение*:

Отправить сообщение

Артикул	Фасовка	Цена	Срок поставки	Купить товар
11753	10 minipreps	–	1 д	Запросить образец
31753	100 minipreps	$525	1 д	В корзину

Запросить образец

Количество *

Имя *

Компания *

Телефон *

email *

Комментарий

Отправить запрос

Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

---

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ

Введено некорректное число товаров для добавления.