Инструкция к набору LumiMAG для выделения геномной ДНК из цельной крови и буккального эпителия

Набор предназначен для быстрого и высокоэффективного выделения геномной ДНК из цельной крови и соскобов эпителия на магнитных частицах. Он совместим с автоматическими рабочими станциями KingFisher™ Flex, MagMAX™ Express-96, KingFisher™ Duo Prime, KingFisher™ mL, а также подходит для ручного выделения ДНК с использованием магнитного штатива.

Полученная ДНК не содержит примесей белков, подходит для проведения ПЦР, обработки эндонуклеазами рестрикции, Саузерн-блоттинга, подготовки образцов для секвенирования по методу Сэнгера и NGS-секвенирования.

Состав набора

Компонент набора Количество
31753
100 minipreps
D1315, Магнитные частицы / Magnetic Beads (100 мг/мл), 2 mL 1
62850, Протеиназа К / Proteinase К (лиофилизованная), 100 mg 1
C3850, Буфер для растворения протеиназы К / Proteinase K Dilution Buffer, 1 mL 1
P4150, Лизирующий раствор BB / Lysis Solution BB, 35 mL 2
S6450, Промывочный раствор MAG A / Wash Solution MAG A (с GuHCl), 50 mL 1
K1350, Элюирующий буфер / Elution Buffer (10 мМ Tris-HCl, pH 8.5), 10 mL 1
K2250, Промывочный раствор B / Wash Solution B (концентрат 5x для разбавления 96% этанолом), 10.0 mL 1

Хранить при при комнатной температуре.

Срок хранения 12 месяцев.

Необходимое оборудование и материалы, не входящие в состав набора:

  • Автоматическая рабочая станция (KingFisher™ Flex, MagMAX™ Express-96, KingFisher™ Duo Prime, KingFisher™ mL) / магнитный штатив
  • При использовании магнитного штатива: пробирки типа эппендорф объемом 1.5 мл (2 пробирки для выделения ДНК из 1 образца)
  • 96 % этанол
  • Натрий-фосфатный буфер (PBS) для выделения ДНК из соскобов эпителия
  • (опционально) шейкер для планшетов
  • Расходный пластик при использовании автоматической рабочей станции:
KingFisher™ Flex Purification System или MagMAX™ Express-96 Deep Well Magnetic Particle Processor
95040460 96-луночный планшет Microtiter DW с глубокими лунками
97002540 Планшет KingFisher 96 KF 200 мкл
97002534 Гребенка наконечников KingFisher 96 для 96 магнитов DW-формат
Адгезивная фольга для заклеивания планшетов
KingFisher™ Duo Prime
97003530 Набор Combi для KingFisher Duo для планшета Microtiter с глубокими лунками (набор планшетов, гребенок наконечников и стрипов для элюирования)
или
97003520 Стрип для элюирования для KingFisher Duo
97003500 Гребенка наконечников (12-канальные) для 96-лун. планшета Microtiter с глубокими лунками
95040460 96-луночный планшет Microtiter с глубокими лунками
KingFisher™ mL
97002141 KingFisher mL Combi 240 (набор стрипов и гребенок наконечников)
или
97002111 Гребенка наконечников KingFisher mL
97002121 Стрип KingFisher mL

Перед началом работы

  1. Разбавьте концентрат промывочного раствора B в 5 раз 96 % этанолом (к указанному на банке объему концентрата добавьте 4 объема 96 % этанола), поставьте отметку о добавлении этанола на крышке.
  2. Добавьте 1 мл буфера для растворения протеиназы К в пробирку с лиофилизованной протеиназой К, тщательно перемешайте, сбросьте капли центрифугированием.
    ! Раствор протеиназы К после приготовления хранить в морозилке при −20 °С.
  3. При наличии осадка в лизирующем растворе BB и промывочном растворе MAG А прогрейте их в термостате до температуры не выше 50 °С и дождитесь полного растворения осадка.
  4. В случае использования шейкера для планшетов, подберите оптимальные условия для эффективного перемешивания:
    • Убедитесь, что планшет плотно фиксируется в шейкере
    • Добавьте в лунки планшета 1 мл воды и накройте планшет фольгой. Определите максимальную скорость шейкера, при которой вода из лунок не выплескивается на фольгу.

Подготовка образцов

Соскобы эпителия:

  1. Добавьте в чистую 1,5 мл пробирку 1 мл PBS.
  2. Тщательно промойте в PBS палочку с соскобом эпителия. Отрежьте верхнюю часть палочки, закройте пробирку.
  3. Встряхните содержимое пробирки с помощью вортекса в течение 2-3 минут.
  4. В качестве образца используйте 200 мкл супернатанта.

Цельная кровь: Тщательно перемешайте пробирку с кровью и используйте 200 мкл в качестве образца.

Выделение ДНК с использованием автоматической рабочей станции KingFisher™ Flex, MagMAX™ Express-96

  1. Подготовьте планшеты для автоматической обработки образцов на приборе согласно таблице ниже.
    ! Заклейте адгезивной фольгой приготовленные планшеты с растворами до загрузки в прибор для предотвращения контаминации и испарения растворов.
ID планшета Позиция планшета в приборе Тип планшета Реагент Объем на лунку
Wash Plate 1 2 С глубокими лунками Промывочный раствор MAG A 500 мкл
Wash Plate 2 3 С глубокими лунками Промывочный раствор B 500 мкл
Elution 4 стандартный Элюирующий буфер 90 мкл
Tip Comb 5 стандартный Поместите гребенку наконечников в планшет
  1. Тщательно ресуспендируйте суспензию магнитных частиц на вортексе.
  2. В отдельной пробирке приготовьте смесь магнитных частиц с раствором протеиназы К по схеме: 30 мкл смеси на 1 образец = 20 мкл суспензии магнитных частиц + 10 мкл раствора протеиназы К.
  3. Тщательно перемешайте смесь магнитных частиц и протеиназы К. Внесите по 30 мкл смеси в лунки планшета (с глубокими лунками).
  4. Добавьте по 200 мкл образца цельной крови/соскоба эпителия (см. раздел Подготовка образцов) к смеси магнитных частиц и протеиназы К.
  5. Тщательно перемешайте содержимое лунок планшета:
    • С использованием шейкера для планшетов 2 минуты при максимальных оборотах (предварительно определив максимальные обороты, см. раздел Перед началом работы),
    • ИЛИ
    • Пипетированием, после чего инкубируйте 2 минуты при комнатной температуре.
  6. Добавьте в лунки по 700 мкл Лизирующего раствора BB.
  7. Переходите к процедуре автоматической обработки образцов на приборе. Для этого выберите соответствующую программу на приборе и запустите ее.
    Используйте программу MagMAX_CORE:
Название прибора Название программы с нагревом Название программы без нагрева (опционально)
KingFisher™ Flex MagMAX_CORE_Flex.bdz MagMAX_CORE_Flex_no_heat.bdz
KingFisher™ 96 MagMAX™ Express-96 MagMAX_CORE_KF-96.bdz MagMAX_CORE_KF-96_no_heat.bdz
  1. Следуя указаниям прибора, поместите в прибор подготовленные планшеты с растворами (п.1) и с образцами (п.7).

Хранение выделенной ДНК: в морозильной камере (−20 °С), кратковременно при +4 °С.

Выделение ДНК с использованием автоматической рабочей станции KingFisher™ Duo Prime, KingFisher™ mL

  1. Тщательно ресуспендируйте суспензию магнитных частиц на вортексе.
  2. В отдельной пробирке приготовьте смесь магнитных частиц с раствором протеиназы К по схеме: 30 мкл смеси на 1 образец = 20 мкл суспензии магнитных частиц + 10 мкл раствора протеиназы К.
  3. Тщательно перемешайте смесь магнитных частиц и протеиназы К. Внесите по 30 мкл смеси в лунки планшета/стрипа.
  4. Добавьте по 200 мкл образца цельной крови/соскоба эпителия (см. раздел Подготовка образцов) к смеси магнитных частиц и протеиназы К.
  5. Тщательно перемешайте содержимое лунок планшета/стрипа:
    • С использованием шейкера для планшетов 2 минуты при максимальных оборотах (предварительно определив максимальные обороты, см. раздел Перед началом работы),
    • ИЛИ
    • При работе со стрипами для KingFisher™ mL: пипетированием, после чего инкубируйте 2 минуты при комнатной температуре.
  6. Добавьте в лунки по 700 мкл Лизирующего раствора BB.
  7. Добавьте Промывочный раствор MAG A, Промывочный раствор B, Элюирующий буфер и образцы в соответствующие лунки планшета/стрипа согласно таблице ниже.
    Загружайте на прибор гребенки наконечников и приготовленные согласно таблице готовые планшеты/стрипы одновременно.
KingFisher™ Duo Prime
ID ряда Ряд в планшете Тип планшета Реагент Объем на лунку
Sample A С глубокими лунками Образец (полученный в п.6) 930 мкл
Wash 1 B Промывочный раствор MAG A 500 мкл
Wash 2 C Промывочный раствор B 500 мкл
Elution Отдельный стрип Стрип для элюирования Элюирующий буфер 90 мкл
Tip Comb H С глубокими лунками Поместите гребенку наконечников в планшет
  
KingFisher™ mL
ID позиции Позиция стрипа в приборе Лунка Реагент Объем на лунку
Sample 1 Стандартная Образец (полученный в п.6) 930 мкл
Wash 1 2 Промывочный раствор MAG A 500 мкл
Wash 2 3 Промывочный раствор B 500 мкл
Elution 4 Элюирующий буфер 90 мкл
Tip Comb Поместите гребенку в держатель.
  1. Переходите к процедуре автоматической обработки образцов на приборе. Для этого выберите соответствующую программу на инструменте и запустите ее.
    Используйте программу MagMAX_CORE:
Название прибора Название программы
с нагревом
Название программы
без нагрева
KingFisher™ Duo Prime MagMAX_CORE_DUO.bdz MagMAX_CORE_DUO_no_heat.bdz
KingFisher™ mL MagMAX_CORE_mL_no_heat.bdz

Хранение выделенной ДНК: в морозильной камере (−20 °С), кратковременно при +4 °С.

Выделение ДНК с использованием магнитного штатива

  1. Тщательно ресуспендируйте суспензию магнитных частиц на вортексе.
  2. В отдельной пробирке приготовьте смесь магнитных частиц с раствором протеиназы К по схеме: 30 мкл смеси на 1 образец = 20 мкл магнитных частиц + 10 мкл раствора протеиназы К.
  3. Тщательно перемешайте смесь магнитных частиц и протеиназы К. Внесите по 30 мкл смеси в отдельные пробирки, совместимые с магнитным штативом.
  4. Добавьте по 200 мкл образца цельной крови/соскоба эпителия (см. раздел Подготовка образцов) в пробирку со смесью магнитных частиц и протеиназы К.
  5. Тщательно перемешайте содержимое пробирки на вортексе. Инкубируйте 2 минуты при комнатной температуре.
  6. Добавьте в каждую пробирку 700 мкл Лизирующего раствора BB. Тщательно перемешайте на вортексе.
  7. Поместите пробирки в магнитный штатив. Подождите, пока магнитные частицы полностью перейдут в осадок. Тщательно удалите супернатант (например, с помощью дозатора).
  8. Добавьте 500 мкл Промывочного раствора MAG A, тщательно перемешайте на вортексе или пипетированием. Поместите пробирки в магнитный штатив, после осаждения частиц удалите супернатант.
  9. Добавьте 500 мкл Промывочного раствора B, тщательно перемешайте на вортексе или пипетированием. Поместите пробирки в магнитный штатив, после осаждения частиц удалите супернатант.
  10. Добавьте 90 мкл Элюирующего буфера, тщательно перемешайте на вортексе или пипетированием. Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре. Поместите пробирки в магнитный штатив, после осаждения частиц супернатант содержит выделенную геномную ДНК. Перенесите супернатант в новую чистую пробирку.

Хранение выделенной ДНК: в морозильной камере (−20 °С), кратковременно при +4 °С.

Наборы

Набор LumiMAG для выделения геномной ДНК из цельной крови и буккального эпителия

Набор на магнитных частицах для высокоэффективного выделения геномной ДНК из цельной крови и соскобов эпителия. Совместим с автоматическими рабочими станциями и ручным выделением с использованием магнитного штатива.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11753 10 minipreps –   в наличии
31753 100 minipreps $480.00 в наличии

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.