Инструкция к наборам для мечения клеточных мембран с помощью красителей PKH

Состав набора

Компонент набора Количество
13201
100 uL dye, 1x buffer 		23201
100 uL dye, 5x buffer 		33201
500 uL dye, 1x buffer 		43201
500 uL dye, 5x buffer 		14201
100 uL dye, 1x buffer 		24201
100 uL dye, 5x buffer 		34201
500 uL dye, 1x buffer 		44201
500 uL dye, 5x buffer 		17201
100 uL dye, 1x buffer 		27201
100 uL dye, 5x buffer 		37201
500 uL dye, 1x buffer 		47201
500 uL dye, 5x buffer
2484-100uL, Краситель PKH26, 1mM раствор в изопропаноле, 100 uL 1 1 5 5 — — — — — — — —
K6150, Буфер для разведения PKH, 1x, 10 mL 5 — 25 — 5 — 25 — 5 — 25 —
K7150, Буфер для разведения PKH, 5x, 10 mL — 1 — 5 — 1 — 5 — 1 — 5
2485-100uL, Краситель PKH2, 1mM раствор в изопропаноле, 100 uL — — — — 1 1 5 5 — — — —
2801-100uL, Краситель PKH800, 1mM раствор в изопропаноле, 100 uL — — — — — — — — 1 1 5 5

Хранить при +4°С. Прогреть до комнатной температуры перед использованием.

Срок хранения 12 месяцев.

Рекомендации по использованию набора

  • В зависимости от типа клеток и эксперимента оптимальные концентрации красителя и клеток могут отличаться, поэтому рекомендуется оценивать жизнеспособность клеток, гомогенность и интенсивность флуоресценции после окрашивания.
  • Не используйте растворы, содержащие азиды, при окрашивании красителями PKH.
  • Более однородное окрашивание достигается при использовании суспензии клеток.

Протокол

Протокол использования набора для мечения клеточных мембран красителями PKH на примере адгезионной культуры RAW264.7, 1×106 клеток в образце, финальная концентрация красителей PKH — 2 µМ, финальный объем 200 мкл.

  1. Непосредственно перед окрашиванием приготовьте раствор красителя PKH. Добавьте 1 мкл раствора красителя PKH (PKH dye, 1 mM solution in isopropanol) к 9 мкл 96% этанола, и 4 мкл полученного раствора добавьте к 100 мкл PKH Dyes Diluent, 1x.
    2. *1x PKH Dyes Diluent поставляется либо в готовой форме (K6150, PKH Dyes Diluent, 1x), либо в виде 5х концентрата (K7150, PKH Dyes Diluent, 5x). Для разбавления 5х PKH Dyes Diluent используйте стерильную бидистиллированную воду.
  2. Культуру клеток снимите с подложки скребком в растворе Хенкса (HBSS). Проведите подсчет клеток в образце. Далее добавьте 3 мл раствора Хенкса, центрифугируйте при 400 x g 6 мин при комнатной температуре.
    *Сывороточные белки и липиды также связывают краситель, поэтому рекомендуется однократно промывать клетки бессывороточной средой или фосфатно-солевым буфером.
  3. Супернатант удалите полностью пипеткой, необходимое количество клеток (например, 106 клеток) ресуспендируйте в 100 мкл PKH Dyes Diluent, 1x. Далее добавьте 100 мкл полученного на первом шаге раствора красителя PKH. Пипетируйте и оставьте при комнатной температуре на 5 мин. Конечная концентрация красителя PKH в растворе с клетками — 2 µМ.
    *Для воспроизводимых результатов важно минимизировать количество супернатанта перед ресуспендированием клеток.
    *Не оставляйте клетки в PKH Dyes Diluent в течение длительного времени.
    *Поскольку окрашивание происходит практически мгновенно, быстрое диспергирование клеток в растворе красителя имеет важное значение для яркого, однородного и воспроизводимого мечения.
  4. Добавьте 2 мл фетальной бычьей сыворотки для остановки реакции, инкубируйте 1 мин. Центрифугируйте при 400 x g 10 мин при комнатной температуре.
    *Не используйте для остановки реакции бессывороточную среду или буферные растворы, которые вызывают образование агрегатов красителя.
  5. Супернатант удалите, ресуспендируйте клетки в 5 мл полной питательной среды, перенесите в новую пробирку. Отберите аликвоты для оценки жизнеспособности трипановым синим. Центрифугируйте при 400 x g 10 мин при комнатной температуре.
  6. Ресуспендируйте клетки в буфере, необходимом для дальнейшего анализа (микроскопия, проточная цитофлуориметрия и др.).
    *Окрашенные клетки можно фиксировать 2% параформальдегидом, и окраска остается стабильной в течение не менее 3 недель, если образцы защищены от света.

Рекомендации по хранению:

Раствор красителей PKH можно хранить при комнатной температуре или в холодильнике в защищенном от света месте. Рекомендуется проверить раствор на наличие осадка перед использованием. Если в растворе красителя заметен осадок, слегка нагрейте его на водяной бане при 37°C и обработайте ультразвуком или встряхните до повторного растворения.

Раствор PKH Dyes Diluent поставляется в виде однократного либо пятикратного раствора в стерильной емкости, его рекомендуется хранить в холодильнике и доводить до комнатной температуры непосредственно перед использованием.

Наборы

PKH26, набор для мечения клеточных мембран

Готовый набор для мечения мембран клеток красным флуоресцентным красителем PKH26 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
23201
100 uL dye, 5x buffer
$225 1 д
13201
100 uL dye, 1x buffer
$290 1 д
43201
500 uL dye, 5x buffer
$1125 1 д
33201
500 uL dye, 1x buffer
$1230 21 д
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

PKH2, набор для мечения клеточных мембран

Готовый набор для мечения мембран клеток зеленым флуоресцентным красителем PKH2 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
24201
100 uL dye, 5x buffer
$225 1 д
14201
100 uL dye, 1x buffer
$290 1 д
44201
500 uL dye, 5x buffer
$1125 1 д
34201
500 uL dye, 1x buffer
$1230 21 д
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

PKH800, набор для мечения клеточных мембран

Готовый набор для мечения мембран клеток ближним инфракрасным флуоресцентным красителем PKH800 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
27201
100 uL dye, 5x buffer
$225 1 д
17201
100 uL dye, 1x buffer
$290 1 д
47201
500 uL dye, 5x buffer
$1125 1 д
37201
500 uL dye, 1x buffer
$1230 21 д
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Буфер для разведения PKH

Буфер для мечения клеточных мембран красителями серии PKH.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11955
/ 5x 10 мл
1 pcs
$145 1 д
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!
Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.