Есть ROX референсный краситель? А если найду? — в погоне за диагностическими тестами на COVID19
Все хотят делать тесты на коронавирус. Поэтому с реагентами для реал-тайм ПЦР у нас в компании полный аншлаг. А мы что? Мы тоже хотим, чтобы пандемия поскорее закончилась. Поэтому мы тоже в деле. Провели оптимизацию, отмасштабировали синтез и, вуаля — референсный краситель ROX теперь производим литрами в неделю. Поэтому теперь готовы предложить много реагента. Очень много реагента! А цену точно нигде ниже не найдёте. Гарантируем. Поэтому если интересно — звоните, пишите, мы всегда на связи и работаем, пока все вынужденно самоизолировались дома.
А теперь небольшой ликбез для тех, кто не в курсе. Референсный краситель ROX — это пассивный референсный краситель для количественной ПЦР. Он используется для нормализации интенсивности флуоресценции. Не зря в определении слово «пассивный» — флуоресценция ROX не зависит ни от самой реакции ПЦР, ни от количества матрицы в пробирке. А вот если есть различия в длине оптического пути для лунок планшета (да-да, такое бывает у некоторых реалтаймеров и зависит от конструкции прибора), или учёный (назовем его — Вася) напустил воздушных пузырьков в лунки (ненарочно, конечно), или, чего уж греха таить, дозатор тоже ошибается, то тогда интенсивность флуоресценции тоже изменится, причём как ROX, так и репортерного красителя (интеркалирующие красители или зонды с метками —у нас это всё тоже есть). Поделив одно на другое (это и называют «нормализация») мы получаем нормализованную интенсивность флуоресценции (Rn — normalized reporter intensity). Тогда уже можно результаты между лунками сравнивать, делать выводы и писать статьи. Именно по этой причине мануалы многих реал-тайм амплификаторов* требуют добавлять ROX в качестве внутреннего референса. Они регистрируют интенсивность флуоресценции ROX и репортерного красителя, и нормализуют сигнал. В итоге учёный Вася доволен, и переделывать ничего не надо.
* например, производства Applied Biosystems (7000, 7300, 7500, 7500 Fast, 7900HT, QuantStudio, StepOne, StepOnePlus, ViiA 7 System), Bio-Rad (CFX384, CFX 96, iQ5), Roche (LC 480), Stratagene (MX3000P, MX3005P, MX4000P) и др.