Di-8-ANEPPS, индикатор мембранного потенциала

Di-8-ANEPPS является представителем семейства потенциал-чувствительных красителей амино-нафтил-этенил-пиридиния (Amino-Naphthyl-Ethenyl-Pyridinium, ANEP), применяемым в качестве быстрореагирующего индикатора мембранного потенциала. Краситель флуоресцирует исключительно будучи ассоциированным с клеточными мембранами и реагирует только на изменения электрического поля в непосредственном окружении.

Оптический ответ Di-8-ANEPPS характеризуется скоростью, достаточной для регистрации миллисекундных изменений мембранного потенциала в возбудимых тканях, таких как отдельные нейроны и кардиомиоциты. Амплитуда потенциал-зависимого изменения флуоресценции составляет 2–10% на 100 мВ. Краситель демонстрирует потенциал-зависимый сдвиг спектра возбуждения, что позволяет использовать его для ратиометрического количественного анализа динамики мембранного потенциала.

Di-8-ANEPPS обладает более липофильными свойствами и лучше удерживается внешним слое клеточной мембраны, чем другие красители семейства ANEP, что делает его идеально подходящим для долгосрочных экспериментов. Благодаря способности прочно связываться с мембраной, он также может применяться в качестве эффективного маркера плазматических мембран.

Максимумы возбуждения/эмиссии Di-8-ANEPPS в метаноле составляют 499/708 нм соответственно. В липидах и клеточных мембранах спектры возбуждения и излучения красителя обычно смещены в синий цвет по сравнению с органическими растворителями.

Di-8-ANEPPS можно вводить в клетки прямым добавлением стокового раствора в культуральную среду, с применением мягкого детергента Pluronic^® F-127 или методом ретроградного мечения. В качестве отправной точки используйте рабочую концентрацию 5-10 мкМ. Точную концентрацию красителя следует определять экспериментально.