кПЦР с красителем dsGreen®
Флуоресцентный интеркалирующий краситель dsGreen обладает очень высокой чувствительностью к наличию двухцепочечной ДНК и используется для неспецифической детекции амплификации ДНК в ПЦР «в реальном времени» (количественной ПЦР).
- Если dsGreen хранился при температуре ниже 20 °С необходимо заранее его разморозить и хранить при комнатной температуре в темноте. Для быстрого оттаивания краситель можно инкубировать при температурах до 50 °С.
- Рассчитайте объемы реагентов, необходимых для постановки реакции согласно протоколу производителя реагентов для ПЦР. Помните, что краситель dsGreen (100х в стоковой концентрации) должен быть разведен в смеси для ПЦР до 1х концентрации.
- Приготовьте 1х смесь для ПЦР без образцов ДНК согласно протоколу производителя реагентов для ПЦР, добавьте необходимое количество dsGreen. Если Вы используете Taq-полимерзу без горячего старта, держите смесь для ПЦР на льду.
- Поместите необходимое количество смеси для ПЦР в пробирки для ПЦР, добавьте образцы ДНК.
- Проведите полимеразную цепную реакцию согласно инструкции к Вашему амплификатору.
Замечания:
При проведении ПЦР-анализа всегда используйте положительный и отрицательный контроли. Программа амплификации для количественной ПЦР не отличается от программы для стандартной ПЦР для конкретных праймеров/матрицы. Для детекции используйте канал FAM (для Rotor-Gene — зеленый канал). Для того, чтобы иметь возможность отличать специфический продукт амплификации от димеров праймеров добавьте в программу амплификации этап со съемкой кривой плавления ампликона.
Похожие товары
dsGreen для ПЦР реального времени, 100×
Флуоресцентный краситель для детекции амплификации в ПЦР реального времени в готовом 100×-растворе для добавления в мастер-микс.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
A1010 | 50 uL | – | в наличии | |
11010 | 100 uL | $39 | в наличии | |
41010 | 1 mL | $235 | в наличии | |
71010 | 5 mL | $510 | в наличии | |
91010 | 50 mL | $2670 | в наличии |