• Товары и услуги
• Click chemistry
• Нефлуоресцентные алкины
• EU (5-этинил уридин)

EU (5-этинил уридин)

5-этинил уридин (EU) — широко используемый в молекулярной биологии реагент для изучения и оценки синтеза РНК.

EU свободно проникает в клетки и фосфорилируется киназами в рамках дополнительного пути синтеза пиримидиновых нуклеотидов. Образовавшийся 5-этинил уридин-5’-трифосфат с помощью РНК-полимераз I, II, III встраивается в образующуюся de novo РНК вместо уридина, при этом не встраиваясь в ДНК.

Клеточная РНК, содержащая модифицированный уридин, может быть достаточно быстро и с высокой чувствительностью детектирована с использованием реакции Click Chemistry и последующей флуоресцентной визуализации. Так, алкинильная группа в пятом положении уридина в структуре образовавшейся РНК реагирует с азидами флуоресцентных красителей или биотина по реакции медь-катализируемого циклоприсоединения (CuAAC). Меченая РНК может быть детектирована различными методами, например с использованием флуоресцентной микроскопии или проточной цитометрии, что позволяет оценить уровни транскрипции в клетке.

Кроме этого, в экспериментах in vivo 5-этинил уридин имеет преимущество перед своим аналогом, 5-бром уридином, поскольку азиды флуоресцентных красителей обладают гораздо лучшей проникающей способностью в ткани по сравнению с антителами, которые используются для детекции 5-бром уридина. Это позволяет использовать для анализа крупные образцы тканей и органов и окрашивать их целиком.