Пропидия моноазид

Моноазид пропидия (ПМА) — непроникающий в живые клетки фотоактивируемый ДНК-связывающий краситель, предназначенный для селективного различения жизнеспособных клеток и клеток с нарушенной целостностью мембраны. Являясь производным пропидия, ПМА содержит фотореакционноспособную азидную группу, которая после облучения видимым светом образует ковалентные связи с ДНК. Образующиеся аддукты ПМА—ДНК не поддаются эффективной амплификации методом ПЦР и практически не анализируются при секвенировании, что позволяет избирательно исследовать нуклеиновые кислоты, происходящие только из жизнеспособных клеток с интактной плазматической мембраной.

Поскольку ПМА не проникает через неповрежденные клеточные мембраны, краситель попадает только в мертвые или сильно поврежденные клетки, а также связывается со свободной внеклеточной ДНК. После фотоактивации ДНК нежизнеспособных клеток ковалентно модифицируется и исключается из последующего молекулярного анализа. Реагент обычно используют перед выделением ДНК и проведением количественной ПЦР, цифровой ПЦР или секвенирования нового поколения (NGS) для предотвращения амплификации ДНК, происходящей из мертвых клеток, при сохранении сигнала от жизнеспособной клеточной популяции.

Описанный принцип также лежит в основе метода viability PCR (vPCR), который позволяет надежно различать живые и мертвые микроорганизмы в исследованиях окружающей среды, пищевой безопасности, клинической диагностике и анализе микробиома. Кроме того, PMA может использоваться для флуоресцентной микроскопии с целью выявления клеток с нарушенной целостностью мембраны.

По сравнению с моноазидом этидия (ЭМА), ПМА обладает значительно более низкой проницаемостью для жизнеспособных клеток благодаря более высокому положительному заряду, что обеспечивает лучшую селективность и снижает вероятность ложноположительного мечения живых клеток.