Набор предназначен для быстрого и высокоэффективного выделения плазмидной ДНК из культур клеток Escherichia coli на спин-колонках. На первом этапе осадок клеток ресуспендируют, затем с использованием лизирующего раствора клетки подвергают щелочному лизису. К полученному лизату добавляют нейтрализующий буфер, способствующий селективному связыванию ДНК с мембраной колонки в присутствии хаотропных агентов. Денатурированные белки, геномная ДНК и SDS осаждаются центрифугированием, а супернатант, содержащий плазмидную ДНК, наносится на колонку. На следующем этапе производится серия последовательных промывок ДНК, сорбированной на колонке. Особый состав промывочных растворов способствует полному удалению примесей. На заключительном этапе ДНК элюируется с колонки специально подобранным буфером или, при необходимости, деионизованной водой.
Основные характеристики набора:
Исходный материал: культура клеток E.coli, несущая плазмидную ДНК
Время выделения: 15 минут
Максимальная емкость колонки: 30 мкг ДНК
Выход ДНК: до 30 мкг ДНК в зависимости от копийности плазмиды и объема культуры для выделения
Выделенная ДНК: OD260/OD280 >1.8
Выделенная плазмидная ДНК может использоваться для проведения ПЦР, лигирования, трансформации, обработки эндонуклеазами рестрикции, транскрипции in vitro, подготовки образцов для секвенирования по методу Сэнгера и NGS-секвенирования и др.