Извините, данная страница недоступна на русском языке. Просмотрите, пожалуйста, английскую версию страницы.

Protocol: Click-Chemistry Labeling of Oligonucleotides and DNA

Click chemistry is a versatile reaction that can be used for the synthesis of a variety of conjugates. Virtually any biomolecule can be easily labelled with small molecules, such as fluorescent dyes, biotin, etc using click chemistry method.

Click chemistry reaction takes place between two components: azide and alkyne (terminal acetylene). Both azido and alkyne groups are nearly never encountered in natural biomolecules. Hence, the reaction is highly bioorthogonal and specific. If there is a need to label an oligonucleotide, alkyne-modified oligonucleotides can be ordered at many of the custom oligo-synthesizing facilities and companies.

Protocol

We recommend using the following general protocol for Click chemistry labeling of alkyne-modified oligonucleotides with azides produced by Lumiprobe Corp. The auxiliary reagents can be ordered at Lumiprobe Corp.

  1. Calculate the volumes of reagents required for Click chemistry labeling using the table below. Prepare the required stock solutions (see Appendix).
    Reagent Final concentration in the mixture Stock solution concentration
    Oligonucleotide, alkyne-modified Varies (20 — 200 uM) varies
    Azide 1.5 x (oligonucleotide concentration) 10 mM in DMSO
    DMSO 50 vol %
    Ascorbic acid 0.5 mM 5 mM in water
    Cu-TBTA complex 0.5 mM 10 mM in 55 vol % DMSO
  2. Dissolve alkyne-modified oligonucleotide or DNA in water in a pressure-tight vial.
  3. Add 2M triethylammonium acetate buffer, pH 7.0, to final concentration 0.2 M.
  4. Add DMSO, and vortex.
  5. Add azide stock solution (10 mM in DMSO), and vortex.
  6. Add the required volume of 5mM Ascorbic Acid Stock solution to the mixture, and vortex briefly.
  7. Degass the solution by bubbling inert gas in it for 30 seconds. Nitrogen, argon, or helium can be used.
  8. Add the required amount of 10 mM Copper (II)-TBTA Stock in 55% DMSO to the mixture. Flush the vial with inert gas and close the cap.
  9. Vortex the mixture thoroughly. If significant precipitation of azide is observed, heat the vial for 3 minutes at 80°C, and vortex.
  10. Keep at room temperature overnight.
  11. Precipitate the conjugate with acetone (for oligonucleotides) or with ethanol (for DNA). Add at least 4-fold volume of acetone to the mixture (If the volume of the mixture is large, split in several vials). Mix thoroughly and keep at −20°C for 20 minutes.
  12. Centrifuge at 10000 rpm for 10 minutes.
  13. Discard the supernatant.
  14. Wash the pellet with acetone (1 mL), centrifuge at 10000 rpm for 10 minutes.
  15. Discard the supernatant, dry the pellet, and purify the conjugate by RP-HPLC or PAGE.

Appendix. Preparation of stock solutions of the reagents used for click-chemistry labeling and conjugation

5 mM Ascorbic Acid Stock

Preparation Dissolve 18 mg of ascorbic acid in 20 mL of distilled water.
Storage Ascorbic acid is readily oxidized by air. The solution is stable for one day. Use fresh preparations for Click chemistry.

10 mM Copper (II)-TBTA Stock in 55% DMSO

Preparation Dissolve 50 mg of copper (II) sulfate pentahydrate in 10 mL of distilled water. Dissolve 116 mg of TBTA ligand in 11 mL of DMSO. Mix two solutions.
Storage Store at room temperature. The solution is stable for years.

2M Triethylammonium Acetate Buffer, pH 7.0

Preparation Mix 2.78 mL of triethylamine with 1.14 mL of acetic acid. Add water to 10 mL volume, and adjust pH to 7.0.
Storage Store at room temperature. The solution is stable for years.

Related products

BDP 558/568 азид

BDP 558/568 - бордипиррометеновый флуорофор со спектрами поглощения и эмиссии, примерно соответствующими каналу Cyanine3. Это азидопроизводное для Click chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17430 1 mg $110.00 в наличии
27430 5 mg $210.00 в наличии
37430 10 mg $310.00 в наличии
47430 25 mg $410.00 в наличии
57430 50 mg $695.00 в наличии

BDP 650/665 алкин

BDP 650/665 алкин - производное красителя BODIPY, обладающего эмиссией в красной области спектра. Содержит терминальную этинильную группу для конъюгации с азидами посредством Click chemistry. Спектры поглощения и эмиссии BDP 650/665 подходят для канала Cy5 многих приборов.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A84B0 1 mg $110.00 в наличии
B84B0 5 mg $210.00 в наличии
C84B0 10 mg $310.00 в наличии
D84B0 25 mg $410.00 в наличии
E84B0 50 mg $695.00 в наличии
F84B0 100 mg $1190.00 в наличии

BDP R6G алкин

Производное красителя BDP R6G - терминальный алкин для Click chemistry. BDP R6G - бордипиррометеновый краситель, спектры поглощения и эмиссии которого соответствуют R6G (родамину 6G).
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A44B0 1 mg $110.00 в наличии
B44B0 5 mg $210.00 в наличии
C44B0 10 mg $310.00 в наличии
D44B0 25 mg $410.00 в наличии
E44B0 50 mg $695.00 в наличии
F44B0 100 mg $1190.00 в наличии

BDP TMR азид

Бордипиррометеновый краситель с азидогруппой. Спектральные свойства похожи на краситель TAMRA. Благодаря длительному времени жизни возбужденного состояния этот краситель хорошо подходит для измерений поляризации флуоресценции.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
12430 1 mg $110.00 в наличии
22430 5 mg $210.00 5 д
32430 10 mg $310.00 в наличии
42430 25 mg $410.00 в наличии
52430 50 mg $695.00 в наличии
62430 100 mg $1190.00 в наличии

Cu(II)-TBTA комплекс, 10 мМ в 55% водном ДМСО

Катализатор для реакции Click Chemistry. Стабильный комплекс меди (II), который должен быть переведен в степень окисления (I) действием восстановителей.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
21050 1.5 mL $55.00 в наличии

Cyanine3 азид

Азидопроизводное флуоресцентного красителя Cyanine3, аналога Cy3, для конъюгации с помощью Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11030 100 uL, 10 mM/DMSO $110.00 в наличии
31030 500 uL, 10 mM/DMSO $210.00 в наличии
41030 1 mL, 10 mM/DMSO $410.00 в наличии
A1030 1 mg $110.00 в наличии
B1030 5 mg $210.00 в наличии
C1030 10 mg $310.00 в наличии
D1030 25 mg $410.00 в наличии
E1030 50 mg $695.00 в наличии
F1030 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine3 алкин

Алкиновое производное флуоресцентного красителя Cyanine3 для мечения биомолекул по реакции Cu(I)-катализируемого диполярного циклоприсоединения (Click Chemistry).
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A10B0 1 mg $110.00 в наличии
B10B0 5 mg $210.00 в наличии
C10B0 10 mg $310.00 в наличии
D10B0 25 mg $410.00 в наличии
E10B0 50 mg $695.00 в наличии
F10B0 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine3.5 азид

Азидопроизводное красителя Cyanine3.5, аналога Cy3.5, для мечения с помощью реакции Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
12030 100 uL, 10 mM/DMSO $110.00 в наличии
32030 500 uL, 10 mM/DMSO $210.00 в наличии
42030 1 mL, 10 mM/DMSO $410.00 в наличии
A2030 1 mg $110.00 в наличии
B2030 5 mg $210.00 в наличии
C2030 10 mg $310.00 в наличии
D2030 25 mg $410.00 в наличии
E2030 50 mg $695.00 в наличии

Cyanine5 азид

Азидопроизводное Cyanine5 - дальнекрасного флуорофора, совместимого со многими приборами для детекции флуоресценции.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13030 100 uL, 10 mM/DMSO $110.00 в наличии
33030 500 uL, 10 mM/DMSO $210.00 в наличии
43030 1 mL, 10 mM/DMSO $410.00 в наличии
A3030 1 mg $110.00 в наличии
B3030 5 mg $210.00 в наличии
C3030 10 mg $310.00 в наличии
D3030 25 mg $410.00 в наличии
E3030 50 mg $695.00 в наличии
F3030 100 mg $1190.00 5 д

Cyanine5.5 азид

Азидопроизводное красителя Cyanine5.5, флуоресцирующего в дальнекрасной области. Реагент для мечения с помощью Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
14030 100 uL, 10 mM/DMSO $110.00 5 д
34030 500 uL, 10 mM/DMSO $210.00 5 д
44030 1 mL, 10 mM/DMSO $410.00 в наличии
A4030 1 mg $110.00 в наличии
B4030 5 mg $210.00 в наличии
C4030 10 mg $310.00 в наличии
D4030 25 mg $410.00 в наличии
E4030 50 mg $695.00 в наличии

Cyanine5.5 алкин

Дальнекрасный флуоресцентный краситель Cyanine5.5, алкиновое производное для Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A70B0 1 mg $110.00 в наличии
B70B0 5 mg $210.00 в наличии
C70B0 10 mg $310.00 в наличии
D70B0 25 mg $410.00 в наличии
E70B0 50 mg $695.00 в наличии
F70B0 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine7 азид

Азидопроизводное флуорофора Cyanine7, имеющего эмиссию в ближней инфракрасной области.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15030 100 uL, 10 mM/DMSO $110.00 в наличии
35030 500 uL, 10 mM/DMSO $210.00 в наличии
45030 1 mL, 10 mM/DMSO $410.00 5 д
A5030 1 mg $110.00 в наличии
B5030 5 mg $210.00 в наличии
C5030 10 mg $310.00 в наличии
D5030 25 mg $410.00 в наличии
E5030 50 mg $695.00 в наличии

Cyanine7.5 азид

Азидопроизводное инфракрасного флуорофора Cyanine7.5, подходящего для неинвазивного ИК-имэджинга. Азид можно использовать для конъюгации с алкинами в реакции Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
46030 1 mL, 10 mM in DMSO $410.00 в наличии
16030 100 uL, 10 mM/DMSO $110.00 в наличии
36030 500 uL, 10 mM/DMSO $210.00 в наличии
A6030 1 mg $110.00 в наличии
B6030 5 mg $210.00 10 д
C6030 10 mg $310.00 в наличии
D6030 25 mg $410.00 в наличии
E6030 50 mg $695.00 в наличии
F6030 100 mg $1190.00 в наличии

FAM (флуоресцеин) азид, 5-изомер

Азидопроизводное красителя FAM для присоединения к алкинилированным молекулам с помощью Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
14130 100 uL, 10 mM/DMSO $80.00 в наличии
34130 500 uL, 10 mM/DMSO $100.00 в наличии
44130 1 mL, 10 mM/DMSO $150.00 в наличии
A4130 1 mg $80.00 в наличии
B4130 5 mg $100.00 в наличии
C4130 10 mg $150.00 в наличии
D4130 25 mg $295.00 в наличии
E4130 50 mg $450.00 в наличии
F4130 100 mg $780.00 в наличии

FAM (флуоресцеин) азид, 6-изомер

Флуоресцеин в виде азида для Click chemistry, чистый 6-изомер.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15130 100 uL, 10 mM/DMSO $80.00 в наличии
35130 500 uL, 10 mM/DMSO $100.00 в наличии
45130 1 mL, 10 mM/DMSO $150.00 в наличии
A5130 1 mg $80.00 в наличии
B5130 5 mg $100.00 в наличии
C5130 10 mg $150.00 в наличии
D5130 25 mg $295.00 в наличии
E5130 50 mg $450.00 в наличии
F5130 100 mg $780.00 в наличии

JOE азид, 5- изомер

JOE - хлорированный краситель флуоресцеинового ряда, часто используемый для мечения олигонуклеотидов. Он заменяет другой хлорированный флуоресцеин, краситель HEX. JOE менее гидрофобен, чем HEX. Это производное - азид для Click chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A1130 1 mg $110.00 в наличии
B1130 5 mg $210.00 в наличии
C1130 10 mg $310.00 в наличии
D1130 25 mg $410.00 в наличии
E1130 50 mg $695.00 в наличии
F1130 100 mg $1190.00 в наличии

PEP (фенилэтинилпирен) азид

Флуорофор на основе ПАУ, флуоресцирующий в синей области. Хорошая альтернатива AMCA и другим кумариновым красителям.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A4530 1 mg $110.00 в наличии
B4530 5 mg $210.00 в наличии
C4530 10 mg $310.00 в наличии
D4530 25 mg $410.00 в наличии
E4530 50 mg $695.00 в наличии

R110 азид, 5-изомер

Фотостабильный и яркий краситель для канала FAM в виде азидопроизводного для Click Chemistry, чистый 5-изомер.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
Наличие данного продукта уточняйте, пожалуйста, по запросу.

R110 азид, 6-изомер

Чистый изомер азидопроизводного R110 (родамина 110) - яркого и фотостабильного красителя для канала FAM.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15230 100 uL, 10 mM/DMSO $160.00 21 д
35230 500 uL, 10 mM/DMSO $420.00 21 д
45230 1 mL, 10 mM/DMSO $595.00 21 д

R6G азид, 5-изомер

Родамин 6G - ксантеновый краситель, часто используемый в ПЦР реального времени. Это производное - азид - предназначено для введения R6G посредством Click chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
14430 100 uL, 10 mM/DMSO $110.00 в наличии
34430 500 uL, 10 mM/DMSO $210.00 в наличии
44430 1 mL, 10 mM/DMSO $410.00 в наличии
A4430 1 mg $110.00 в наличии
B4430 5 mg $210.00 в наличии
C4430 10 mg $310.00 в наличии
D4430 25 mg $410.00 в наличии
E4430 50 mg $695.00 в наличии

ROX-азид, 5-изомер

Реагент для мечения олигонуклеотидов и других биомолекул красителем ROX с помощью Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11230 100 uL, 10 mM/DMSO $110.00 в наличии
31230 500 uL, 10 mM/DMSO $210.00 в наличии
41230 1 mL, 10 mM/DMSO $410.00 в наличии
A1230 1 mg $110.00 в наличии
B1230 5 mg $210.00 в наличии
C1230 10 mg $310.00 в наличии
D1230 25 mg $410.00 в наличии
E1230 50 mg $695.00 в наличии

Sulfo-Cyanine3 азид

Азидопроизводное водорастворимого красителя sulfo-Cyanine3, пригодное для мечения различных биомолекул и даже живых клеток с помощью Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A1330 1 mg $110.00 в наличии
B1330 5 mg $290.00 в наличии
C1330 10 mg $470.00 в наличии
D1330 25 mg $690.00 в наличии
E1330 50 mg $1270.00 в наличии
F1330 100 mg $1990.00 в наличии

Sulfo-Cyanine3 алкин

Алкиновое производное водорастворимого красителя sulfo-Cyanine3. Sulfo-Cyanine3 - яркий и фотостабильный краситель, аналог Cy3.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A13B0 1 mg $110.00 в наличии
B13B0 5 mg $290.00 в наличии
C13B0 10 mg $470.00 в наличии
D13B0 25 mg $690.00 в наличии
E13B0 50 mg $1270.00 в наличии
F13B0 100 mg $1990.00 в наличии

Sulfo-Cyanine5 азид

Водорастворимый краситель sulfo-Cyanine5 в виде азида для биоконъюгации методом Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A3330 1 mg $110.00 в наличии
B3330 5 mg $290.00 в наличии
C3330 10 mg $470.00 в наличии
D3330 25 mg $690.00 в наличии
E3330 50 mg $1270.00 в наличии
F3330 100 mg $1990.00 в наличии

Sulfo-Cyanine5 алкин

Водорастворимый краситель sulfo-Cyanine5, содержащий терминальную ацетиленовую группу для медь-катализируемой реакции Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A33B0 1 mg $110.00 в наличии
B33B0 5 mg $290.00 в наличии
C33B0 10 mg $470.00 в наличии
D33B0 25 mg $690.00 в наличии
E33B0 50 mg $1270.00 в наличии
F33B0 100 mg $1990.00 в наличии

sulfo-Cyanine7.5 азид

Sulfo-Cyanine7.5 - очень гидрофильный и водорастворимый краситель для ближней ИК-области. Спектры поглощения и эмиссии красителя напоминают спектры индоцианинового зеленого (ICG, Cardio Green), но sulfo-Cyanine7.5 обладает гораздо более высоким квантовым выходом флуоресценции. Этот краситель отлично подходит для имэджинга in vivo. Это производное - азид для Click chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A6330 1 mg $110.00 в наличии
B6330 5 mg $290.00 в наличии
C6330 10 mg $470.00 в наличии
D6330 25 mg $690.00 в наличии
E6330 50 mg $1270.00 в наличии
F6330 100 mg $1990.00 в наличии

TAMRA алкин, 5-изомер

Терминальный алкин TAMRA для Click Chemistry, чистый 5-изомер.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A71B0 1 mg $110.00 в наличии
B71B0 5 mg $210.00 5 д
C71B0 10 mg $310.00 в наличии
D71B0 25 mg $410.00 в наличии
E71B0 50 mg $695.00 в наличии

Биотин PEG3 азид

Азидопроизводное биотина для мечения алкинилированных биомолекул биотином - аффинной группой, имеющей сродство к стрептавидину.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
C3730 10 mg $40.00 в наличии
D3730 25 mg $90.00 5 д
E3730 50 mg $140.00 в наличии
F3730 100 mg $180.00 в наличии

Биотин алкин

Азидопроизводное биотина для введения аффинной метки в состав биомолекул посредством Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
C37B0 10 mg $90.00 5 д
D37B0 25 mg $160.00 в наличии
E37B0 50 mg $270.00 в наличии
F37B0 100 mg $420.00 в наличии

Перилен азид

Азидопроизводное перилена - яркого и фотостабильного полициклического флуорофора.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A5530 1 mg $110.00 в наличии
B5530 5 mg $210.00 в наличии
C5530 10 mg $310.00 в наличии
D5530 25 mg $410.00 в наличии
E5530 50 mg $695.00 в наличии

Пирен азид 1

Азидопроизводное полициклического ароматического углеводорода пирена, обладающего флуоресценцией и способностью к образованию эксимеров.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A1530 1 mg $110.00 в наличии
B1530 5 mg $210.00 в наличии
C1530 10 mg $310.00 в наличии
D1530 25 mg $410.00 в наличии
E1530 50 mg $695.00 в наличии

Пирен азид 2

Азидопроизводное пирена на основе пиренилуксусной кислоты.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A2530 1 mg $110.00 в наличии
B2530 5 mg $210.00 в наличии
C2530 10 mg $310.00 в наличии
D2530 25 mg $410.00 в наличии
E2530 50 mg $695.00 в наличии

Пирен азид 3

Азидопроизводное пирена с длинным линкером для клик-химии Pyrene azide with even longer linker for Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
Наличие данного продукта уточняйте, пожалуйста, по запросу.

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.