Введение в клик-химию: новый метод мечения и модификации биомолекул

Клик-химия представляет собой реакцию между азидами и алкинами с образованием ковалентного продукта – 1,5-дизамещенного 1,2,3-триазола. Этот процесс также известен как катализируемое медью алкин-азидное циклоприсоединение (CuААЦ, CuAAC).

Click chemistry conjugation generic scheme

Клик-химия основана на катализе медью, при этом катализатор часто вводят в реакционную смесь в виде комплекса с лигандом.

Среди большого разнообразия органических реакций клик-химию часто выбирают в качестве реакции конъюгации из-за целого ряда преимуществ.

Высокая избирательность. Клик-химическая реакция происходит только между азидным и алкиновым компонентами. Она не интерферирует с большинством других органических групп, присутствующих в ДНК и белках, таких как карбоксильные и аминогруппы.
В нативных биомолекулах не содержатся азиды и алкины. Эти группы должны быть специально введены в ДНК и белки. Алкин-содержащая ДНК может быть получена из алкин-фосфорамидитов во время стандартного синтеза олигонуклеотидов. Белки, меченные азидами и алкинами, могут быть получены с помощью азид- и алкин-содержащих активированных эфиров.
Реакция протекает в водной среде. Для клик-химии можно использовать водные растворы ДМСО, ДМФА, ацетонитрила, спиртов или чистую воду и буферы. Реакция биосовместима и может происходить в живых клетках.
Быстрая и количественная реакция. Клик-химия позволяет получать наномоли конъюгатов в разбавленных растворах.
Реакция нечувствительна к pH. В отличие от реакций NHS-эфиров с аминами и некоторых других химических реакций, в клик-химической реакционной смеси не нужно контролировать pH. Также нет необходимости использовать какой-либо специальный буфер, добавлять кислоту или основание — клик-химия хорошо работает в интервалах pH от 4 до 11.
Простой протокол! Здесь вы можете ознакомиться с рекомендуемым нами протоколом для мечения ДНК.

Клик-химия стала универсальным инструментом для модификации ДНК и белков, приготовления конъюгатов и флуоресцентного мечения биомолекул. И именно здесь Lumiprobe приходит на помощь — мы предоставляем реагенты и протоколы для простого и эффективного синтеза различных азидо- и алкин-меченых биомолекул, а также предлагаем большой выбор реакционных флуоресцентных красителей и других репортерных групп. С помощью этих реагентов вы можете легко приготовить любые конъюгаты в своей лаборатории.

Вот лишь несколько примеров:

Флуоресцентно меченые олигонуклеотиды и зонды с двойной меткой для ПЦР в реальном времени

Мы предлагаем алкинфосфорамидиты для легкого синтеза алкин-модифицированных олигонуклеотидов и азидов флуоресцентных красителей. Основанная на клик-химии, эта технология обеспечивает значительные преимущества по сравнению с мечением активированными эфирами или амидитами флуоресцентных красителей.

click chemistry synthesis of dual labeled probes

Флуоресцентная и биотинилированная ДНК

Используйте алкинилтрифосфаты для включения алкина в ДНК с помощью ПЦР, терминации или ник-трансляции. После этого вы можете пометить ДНК любым красителем или биотином в своей лаборатории без необходимости использования специально меченных трифосфатов!

click chemistry labeling of DNA

Флуоресцентные пептиды, белки и антитела

Мы предлагаем алкин- и азид-содержащие активированные эфиры для модификации белков и пептидов. Модифицированные алкином или азидом белки можно затем использовать для приготовления конъюгатов с ДНК, репортерными молекулами или твердыми поверхностями.

click chemistry labeling of proteins and peptides

Конъюгаты пептид-олигонуклеотид

Мы предлагаем азид-содержащие активированные эфиры для мечения пептидов и амидиты алкинов для синтеза этинилированных олигонуклеотидов.

click chemistry construction of peptide-dna conjugates

Биомолекулы, иммобилизованные практически на любой твердой фазе

Мы будем рады проконсультировать вас по модификации твердых поверхностей, предоставить индивидуальные твердые фазы, чтобы помочь вам добиться максимального успеха!

click chemistry immobilization on solid support

Вспомогательные реагенты и катализаторы для клик-химии доступны в нашем каталоге...

... и вы сможете получить с помощью клик-химии почти любые конъюгаты, которые только сможете себе представить... Свяжитесь с нами, чтобы узнать, как клик-химия может вам помочь!

Некоторые обзоры по модификации ДНК с помощью клик-химии:

A.V. Ustinov, I.A. Stepanova, V.V. Dubnyakova, T.S. Zatsepin, E.V. Nozhevnikova, V.A. Korshun. Modification of nucleic acids using [3+2]-dipolar cycloaddition of azides and alkynes. Russ. J. Bioorg. Chem. 36(4), 401–445 (2010). DOI: 10.1134/S1068162010040011

A.H. El-Sagheer, T. Brown. Click chemistry with DNA. Chem. Soc. Rev. 39(4), 1388–1405 (2010). DOI: 10.1039/B901971P

F. Amblard, J.H. Cho, R.F. Schinazi. Cu(I)-catalyzed Huisgen azide-alkyne 1,3-dipolar cycloaddition reaction in nucleoside, nucleotide, and oligonucleotide chemistry. Chem. Rev. 109(9), 4207–4220 (2009). DOI: 10.1021/cr9001462

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ