Hoechst 33258, синий флуоресцентный краситель нуклеиновых кислот

Hoechst 33258 (бисбензимид, HOE 33258) — проникающий в клетки синий флуоресцентный краситель, прочно связывающийся с богатыми аденином и тимином областями малой бороздки двухцепочечной ДНК. Хотя Hoechst 33258 может связываться со всеми нуклеиновыми кислотами, именно связывание его с нитями дцДНК, богатыми А и Т, значительно усиливает флуоресценцию красителя.

Комплекс Hoechst 33258 с ДНК, имеет максимумы возбуждения/эмиссии при 351/463 нм соответственно. Интенсивность флуоресценции Hoechst 33258 увеличивается с увеличением pH растворителя. Несвязанный краситель флуоресцирует в диапазоне 510–540 нм. Зеленая флуоресценция несвязанного Hoechst 33258 может наблюдаться при использовании избыточной концентрации красителя или недостаточном отмывании образца. Hoechst 33258 имеет значительный стоксов сдвиг между спектрами возбуждения и излучения, что делает его идеальным для экспериментов с многоцветным мечением.

Hoechst 33258 способен проникать в живые клетки, однако его клеточная проницаемость в 10 раз меньше, чем Hoechst 33342. Как и все красители его семейства, Hoechst 33258 менее токсичен, чем DAPI, что обеспечивает более высокую жизнеспособность окрашенных клеток.

Hoechst 33258 широко используется во флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии для окрашивания хромосом и ядер в живых и фиксированных клетках. Краситель часто используется для различения конденсированных пикнотических ядер в апоптотических клетках и сортировки клеток.

Флуоресценция Hoechst 33258 гасится бромдезоксиуридином (BrdU), обычно используемым для обнаружения делящихся клеток. Предполагается, что, когда BrdU интегрируется в ДНК, бром деформирует малую бороздку, не позволяя красителям Hoechst достичь оптимального места связывания. Это свойство Hoechst 33258 используется в исследованиях клеточного цикла.

Обычно используемая концентрация красителя для окрашивания бактерий или клеток эукариот составляет 0,1–10 мкг/мл.