Инструкция к набору QuDye dsDNA HS для определения количества двухцепочечной ДНК

Набор предназначен для определения концентрации двухцепочечной ДНК на флуориметре Qubit™. Благодаря селективному связыванию красителя QuDye dsDNA HS c двухцепочечной ДНК на результаты измерения не влияет присутствие в пробе нуклеотидов, одноцепочечной ДНК, РНК, белков и других примесей. Все поставляемые реагенты оптимизированы для работы на флуориметре Qubit™, диапазон измеряемых концентраций ДНК составляет 10 пг/мкл–100 нг/мкл для исходного образца.

Состав набора

Компонент набора Количество
12102
100 assays
13102
100 assays (incl. tubes)
52102
500 assays
53102
500 assays (incl. tubes)
33010, Краситель QuDye dsDNA HS / QuDye dsDNA HS Reagent, 200x, 250 uL 1 1
B9650, Стандарт #1 / dsDNA quantitative standard, 0 ng/uL в TE буфере, 1 mL 1 1
B7650, Стандарт #2 / dsDNA quantitative standard, 10 ng/uL в TE буфере, 1 mL 1 1
G2150, Буфер TE, 20x, 5 mL 1 1
Пробирка тонкостенная (0.5 mL прозрачный полипропилен) 100 500
63010, Краситель QuDye dsDNA HS / QuDye dsDNA HS Reagent, 200x, 1.25 mL 1 1
G9650, Стандарт #1 / dsDNA quantitative standard, 0 ng/uL в TE буфере, 5 mL 1 1
G7650, Стандарт #2 / dsDNA quantitative standard, 10 ng/uL в TE буфере, 5 mL 1 1
N2150, Буфер TE, 20x, 25 mL 1 1

Хранить при температуре +4 °С. Прогреть до +20 °С перед использованием.

Срок хранения 12 месяцев.

! Все измерения с использованием набора QuDye dsDNA HS должны проводиться при комнатной температуре (22–28 °С). Перед началом работы прогрейте все используемые растворы до комнатной температуры. Избегайте нагрева образцов, так как результаты измерений зависят от температуры пробы; в частности, не держите в руках пробирки с образцами непосредственно перед измерениями на флуориметре.

Протокол

  1. Приготовьте 1х TE буфер из расчета, что на каждый образец и на каждый из двух стандартов потребуется 200 мкл буфера. Для этого разведите 20х концентрат TE буфера в 20 раз деионизованной водой.
  2. Приготовьте рабочий раствор красителя QuDye dsDNA HS из расчета, что на каждый образец и на каждый из двух стандартов потребуется около 200 мкл. Для этого разведите 200х концентрат красителя QuDye dsDNA HS в 200 раз 1х TE буфером.
    Например, для измерения 3 образцов и 2 стандартов необходимо приготовить 200 мкл x 5 = 1000 мкл 1х TE буфера и 1000 мкл рабочего раствора красителя (смешайте 5 мкл концентрата красителя QuDye dsDNA HS и 995 мкл 1х TE буфера).
    ! Рабочий раствор красителя рекомендуется использовать в течение нескольких часов после приготовления. При проведении отсроченных измерений рекомендуется беречь от света готовый рабочий раствор красителя.
    ! Для приготовления рабочего раствора красителя используйте только пластиковую посуду. Стеклянная посуда может сорбировать на своих стенках краситель, что приведет к снижению концентрации красителя в образцах и искажению результатов измерений.
  3. Подготовьте две тонкостенные, оптически прозрачные 0.5 мл пластиковые пробирки для стандартов и по одной пробирке для каждого измеряемого образца. Подпишите крышки пробирок (не делайте пометок на стенках пробирок, так как это может привести к некорректному определению интенсивности флуоресценции).
  4. В каждую пробирку для стандартов внесите 190 мкл рабочего раствора красителя QuDye dsDNA HS и 10 мкл стандарта #1 и стандарта #2 соответственно. Перемешайте на вортексе 2–3 секунды, сбросьте капли.
  5. В каждую пробирку для образцов внесите 180–199 мкл рабочего раствора красителя QuDye dsDNA HS и 20–1 мкл образца соответственно (конечный объём в каждой пробирке должен составить 200 мкл). Перемешайте на вортексе 2–3 секунды, сбросьте капли.
    Разведение исследуемого образца опционально и зависит от его исходной концентрации. Исходная концентрация образца должна соответствовать диапазону 10 пг/мкл–100 нг/мкл для измерений на флуориметре Qubit™. В то же время следует избегать использования маленьких объёмов при разбавлении исходного образца, поскольку неточность пипетирования маленьких объёмов может сказаться на результатах измерений.
  6. Инкубируйте все пробирки (содержащие стандарты и исследуемые образцы) 3–5 минут при комнатной температуре.
  7. Проведите измерение интенсивности флуоресценции.

Измерение интенсивности флуоресценции на флуориметре Qubit™

Следующие пункты следует выполнять согласно инструкции к флуориметру Qubit™. В зависимости от версии флуориметра пункты меню могут отличаться от приведенных ниже.

  1. После включения прибора выберите пункт «dsDNA HS (DNA High Sensitivity)». Нажмите «Go».
  2. При каждом новом приготовлении рабочего раствора красителя следует проводить калибровку флуориметра. Выберете пункт «Run new calibration» и нажмите «Go».
  3. Поместите в гнездо пробирку, содержащую стандарт #1, закройте крышку, нажмите «Go». Когда прибор проведет измерение (около 3 сек), удалите пробирку со стандартом #1. Поместите в гнездо пробирку, содержащую стандарт #2, закройте крышку, нажмите «Go». Когда прибор проведет измерение, удалите пробирку со стандартом #2.
  4. После успешного завершения калибровки поместите в гнездо пробирку с экспериментальным образцом, закройте крышку, нажмите «Go». На экране прибор покажет значение QF Value.
    Рассчитайте концентрацию ДНК по формуле: Концентрация ДНК в образце = значение QF x 200/объем образца; или введите объем образца в прибор.

Наборы

Набор QuDye HS для определения количества двухцепочечной ДНК (оптимизирован для ридера Qubit®)

Набор для точного и высокочувствительного определения концентрации ДНК на флуориметре Qubit® в диапазоне от 10 пг/мкл до 100 нг/мкл. Отличается высокой толерантностью к примесям.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
12102 100 assays $55.00 в наличии
13102 100 assays (incl. tubes) $70.00 в наличии
52102 500 assays $255.00 в наличии
53102 500 assays (incl. tubes) $299.00 в наличии

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.