Набор для определения концентрации двухцепочечной ДНК с реагентом Pico488

Набор для квантификации ДНК с красителем Pico488 предназначен для определения низких концентраций двухцепочечной ДНК (не определяемых спектрофотометрически на 260 нм). Из-за селективного связывания красителя Pico488 c двухцепочечной ДНК на результаты измерения практически не влияет присутствие в пробе нуклеотидов, одноцепочечной ДНК, РНК, белков и других примесей.

Линейный диапазон измерения концентрации ДНК от 1 пг/мкл до 5 нг/мкл.

Состав набора

Указанное ниже количество реагентов рассчитано для 200 измерений при работе с объемом измеряемого образца 2 мл.

Наименование компонента Характеристики Количество
Краситель Pico488, 1 мл Раствор в ДМСО 1 шт
20x TE буфер, 25 мл 200 мМ ТрисHCl, 20 мМ EDTA, pH 7,5 1 шт
Геномная ДНК E. coli (стандарт), 1 мл 100 нг/мкл 1 шт

Протокол

1. Приготовьте буфер для проведения анализа - разведите в 20 раз 20х концентрат буфера ТЕ. К примеру, если Вам требуется провести 10 измерений, разбавьте 1 мл буфера 19 мл деионизованной воды для получения 20 мл 1× буфера.

2. Достаньте из холодильника пробирку с красителем, подождите пока краситель в DMSO растает и разведите реагент в 200 раз приготовленным 1х буфером ТЕ. Например, для проведения 20 измерений добавьте 100 мкл реагента Pico488 к 19,9 мл 1х ТЕ. Перемешайте и используйте в течение нескольких часов.

3. Приготовление стандартных растворов ДНК. Приготовьте базовый раствор ДНК с концентрацией 2 нг/мкл в ТЕ, для этого возьмите 30 мкл раствора ДНК E.Coli из набора (100 нг/мкл) и добавьте 1,47 мл 1× ТЕ. Используя этот препарат, приготовьте стандартные растворы ДНК следующих концентраций: 1 нг/мкл, 100 пг/мкл, 10 пг/мкл, 1 пг/мкл (см. таблицу). При желании вы можете приготовить стандарты концентраций в нужном вам узком диапазоне.

Объем ТЕ, мкл Объем базового раствора ДНК 2 нг/мкл, мкл Объем разведенного красителя, мкл Конечная концентрация стандартного раствора ДНК
0 1000 1000 1 нг/мкл
900 100 1000 100 пг/мкл
990 10 1000 10 пг/мкл
999 1 1000 1 пг/мкл
1000 0 1000 0

4. Растворите экспериментальный образец ДНК в буфере ТЕ до конечного объема 1 мл (можно брать любое необходимое количество ДНК). Добавьте 1 мл разведенного красителя. Перемешайте и инкубируйте 5 мин.

5. Измерьте интенсивность флуоресценции стандартного раствора и раствора, содержащего образец исслеодуемой ДНК, на флуориметре. Длина волны возбуждения 503 нм, длина волны флуоресценции 525 нм.

6. Постройте калибровочную кривую, используя данные об уровне флуоресценции стандартных растворов, наложите на точки линию тренда и по уравнению линии тренда рассчитайте концентрацию ДНК в растворе с образцом.

Уравнение линии тренда выглядит следующим образом:

FL= A × C + B, где FL – интенсивность флуоресценции в усл. ед., а C – концентрация ДНК, пг/мл.

Концентрация в исследуемом растворе, где разведен образец ДНК, рассчитывается как:

Csample = (FLsample – B)/A, где FLsample - интенсивность флуоресценции исследуемого раствора.

Концентрация ДНК в исходном образце рассчитывается как:

Сinit = 2000 × Csample/V, где V – исходный объем экспериментального образца ДНК, мкл.

Наборы

Набор Pico488 для определения количества ДНК

Набор для определения количества ДНК по флуоресценции. Для определения используется краситель Pico488. Набор содержит стандарт ДНК и буфер.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
1102-200 200 assays $350.00 в наличии

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.