Подготовка образца

Ткани растений и животных

В качестве образца для выделения нуклеиновых кислот рекомендуется брать 20-30 мг ткани животного или растения. Для выделения могут использоваться как свежие, так и замороженные образцы тканей.

! Хранение образцов тканей при −70°С в течение нескольких месяцев.

1. Поместите свежий или замороженный (−70°С) кусочек ткани в жидкий азот.
2. Перенесите замороженный образец ткани в ступку и тщательно гомогенизируйте образец до состояния порошка.
3. Пересыпьте порошок в отдельную пробирку объёмом 1,5 мл. Дождитесь испарения жидкого азота, при этом не позволяйте образцу оттаять.
4. Добавьте к гомогенату (в указанном порядке): 300 мкл лизирующего раствора NA, 100 мкл воды. Перемешайте.
5. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот», пункт 2.

Культуры клеток животных и бактерий

Для выделения нуклеиновых кислот данным набором рекомендуется брать не более 1-2 × 10⁶ животных клеток и 10⁹ клеток грамотрицательных бактерий.

Адгезионная культура клеток животных: удалите культуральную жидкость, снимите культуру клеток с поверхности пластика трипсином или другим рекомендованным для данной культуры методом. Центрифугируйте клетки 5 мин, 300 × g. Удалите супернатант. Ресуспендируйте находящиеся в осадке клетки в 100 мкл PBS. Перенесите суспензию клеток в новую пробирку объёмом 1,5 мл.

Суспензионная культура клеток животных: отберите объём культуральной жидкости, содержащий необходимое число клеток. Центрифугируйте клетки 5 мин, 300 × g. Удалите супернатант. Ресуспендируйте находящиеся в осадке клетки в 100 мкл PBS. Перенесите суспензию клеток в новую пробирку объёмом 1,5 мл.

Бактериальная культура: бактерии, выращенные на твердой или жидкой питательной среде, соберите центрифугированием в течение 5-10 минут, 3000-5000 × g. Удалите супернатант. Ресуспендируйте находящиеся в осадке клетки в 100 мкл PBS. Перенесите суспензию клеток в новую пробирку объёмом 1,5 мл.

Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

Плазма крови

Данный набор подходит для выделения нуклеиновых кислот из плазмы крови. Для получения плазмы следует использовать образцы цельной периферической крови, содержащие в качестве антикоагулянта ЭДТА в конечной концентрации 2,0 мг/мл или цитрат натрия.

! Не допускается использовать гепарин в качестве антикоагулянта.

! Время от момента взятия периферической крови до получения плазмы не должно составлять более 6 часов.

1. Перемешайте переворачиванием пробирку с кровью, чтобы содержимое пробирки стало гомогенным.
2. Центрифугируйте пробирку с кровью 20 мин, 900 × g при комнатной температуре (+18-25°С).
3. Отберите 100 мкл верхней фракции (плазмы) и перенесите в отдельную пробирку объёмом 1,5 мл.
4. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

! Хранение плазмы при −20°С не более 3 месяцев.

Соскобы эпителиальных клеток

Данный набор подходит для выделения тотальной нуклеиновой кислоты из соскобов эпителиальных клеток, взятых с помощью одноразового стерильного зонда (буккального эпителия, с задней стенки глотки, носоглотки, из уретры, цервикального канала, заднего свода влагалища и т.д.).

1. Внесите 500 мкл физиологического раствора (стерильного) в пробирку объёмом 1,5 мл.
2. Тщательно промойте в физиологическом растворе зонд с соскобом эпителиальных клеток. Прижмите к стенке ватный тампон и вращательным движением отожмите из него остатки физиологического раствора.
3. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Тщательно удалите супернатант.
4. Ресуспендируйте осадок в 100 мкл физиологического раствора (стерильного).
5. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

Моча

1. Внесите 1 мл образца мочи в чистую пробирку объёмом 1,5 мл.
2. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Тщательно удалите супернатант.
3. Ресуспендируйте осадок в 1 мл физиологического раствора (стерильного).
4. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Удалите супернатант.
5. Ресуспендируйте осадок в 100 мкл физиологического раствора (стерильного).
6. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

Слюна, ликвор, синовиальная жидкость

1. Внесите 500 мкл образца в отдельную пробирку объёмом 1,5 мл.
2. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Удалите супернатант, оставив в пробирке около 50 мкл.
3. Ресуспендируйте осадок в 500 мкл физиологического раствора (стерильного).
4. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Удалите супернатант.
5. Ресуспендируйте осадок в 100 мкл физиологического раствора (стерильного).
6. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

Сперма, секрет предстательной железы

1. Внесите 100 мкл образца в отдельную пробирку 1,5 мл.
2. Добавьте к образцу 500 мкл физиологического раствора (стерильного). Перемешайте содержимое пробирки на вортексе в течение 5-10 сек.
3. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Удалите супернатант.
4. Ресуспендируйте осадок в 100 мкл физиологического раствора (стерильного).
5. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

Мазки и смывы

1. Поместите образец в пробирку для центрифугирования.
2. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Удалите супернатант.
3. Ресуспендируйте осадок в 100 мкл физиологического раствора (стерильного).
4. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

Фекалии

1. Внесите 1 мл физиологического раствора (стерильного) в чистую пробирку объёмом 1,5 мл.
2. Поместите в пробирку с физиологическим раствором около 250 мг (мкл) фекалий.
3. Перемешайте содержимое пробирки на вортексе в течение 5-10 сек.
4. Центрифугируйте 3 мин, 100 × g.
5. Перенесите 800-1000 мкл супернатанта в отдельную пробирку 1,5 мл.
6. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Удалите супернатант.
7. Ресуспендируйте осадок в 100 мкл физиологического раствора (стерильного).
8. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

Мокрота

1. В контейнер с образцом добавьте муколизин в соотношении 5:1 (5 частей муколизина : 1 часть мокроты), ориентируясь по градуировке контейнера.
2. Закройте крышку контейнера, встряхните содержимое пробирки и инкубируйте 20-30 мин при комнатной температуре, каждые 2-3 мин встряхивая контейнер.
   ! Обработанную мокроту допускается хранить в контейнере в течение суток при +4°С или долговременно при −20°С.
3. Внесите 500 мкл полученного обработанного муколизином образца мокроты в отдельную пробирку объёмом 1,5 мл.
4. Центрифугируйте 10 мин, 11000 × g. Удалите супернатант.
5. Ресуспендируйте осадок в 100 мкл физиологического раствора (стерильного).
6. Переходите к разделу «Выделение нуклеиновых кислот».

Выделение нуклеиновых кислот

Работы следует выполнять при комнатной температуре, все центрифугирования (если иное прямо не оговорено) при скорости >13000 об/мин (>11000 × g).

Перед началом работы установите термостат на +65°С, поместите в него пробирку с буфером для растворения NA.

Подготовьте образец в объеме 100 мкл в пробирке объёмом 1,5 мл согласно разделу «Подготовка образца».

1. В пробирку с образцом (100 мкл) добавьте 300 мкл лизирующего раствора NA, тщательно перемешайте содержимое пробирки на вортексе.
2. Инкубируйте полученную смесь 15 мин при +65°С.
3. (опционально) Если образец после лизиса содержит нерастворенные компоненты, центрифугируйте пробирку с образцом 10 мин. Перенесите супернатант в новую пробирку объёмом 1,5 мл.
4. Добавьте к образцу 400 мкл раствора для преципитации, перемешайте на вортексе. Центрифугируйте 15 минут.
5. Аккуратно удалите супернатант, не задевая осадок. К осадку добавьте 500 мкл промывочного раствора 1, перемешайте на вортексе. Центрифугируйте 5 мин.
6. Аккуратно удалите супернатант, не задевая осадок. К осадку добавьте 500 мкл промывочного раствора 2, перемешайте на вортексе. Центрифугируйте 5 мин.
7. Тщательно удалите супернатант, не задевая осадок. Подсушите осадок 5 минут в пробирке с открытой крышкой при +65°С.
8. Добавьте 50 мкл предварительно прогретого до +65°С буфера для растворения NA.
9. Инкубируйте пробирку с образцом 5-10 минут при +65°С. Перемешайте содержимое пробирки на вортексе, сбросьте капли центрифугированием. Полученный препарат тотальной нуклеиновой кислоты готов для постановки реакции ПЦР/ОТ-ПЦР без дополнительной пробоподготовки.

Хранение выделенной РНК: Из-за нестабильности РНК выделенный образец хранить не рекомендуется. Полученный препарат РНК необходимо сразу использовать для постановки реакции обратной транскрипции.

Хранение выделенной ДНК: кратковременно при +4°С, долговременно при −20°С не более одного месяца или при −70°С не более одного года.

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ

Введено некорректное число товаров для добавления.