Технология мечения олигонуклеотидов на основе клик-химии

На сегодняшний момент меченые и дважды меченые олигонуклеотидные зонды производятся, главным образом, с использованием меченых красителем амидитов, либо с помощью активированных эфиров. Однако, оба эти метода имеют свои ограничения.

Для компаний и подразделений, занимающихся синтезом олигонуклеотидов на заказ, мы предлагаем использовать мечение олигонуклеотидов с помощью клик-химии.

process scheme

Как и в случае с NHS активированными эфирами, клик-химическое мечение представляет собой двухэтапный протокол. Сначала в олигонуклеотид вводят алкиновый фрагмент с использованием алкин-амидита. На втором этапе, деблокированный олигонуклеотид метят азидным красителем в соответствующих условиях. После этого меченные олигонуклеотиды осаждают ацетоном и очищают (наиболее подходящим методом является ВЭЖХ).

По сравнению с мечением на основе амидита, методом клик-химии получаются более чистые зонды с более высоким выходом, что экономит усилия по очистке конечного продукта. Чувствительный и дорогой краситель при этом не подвергается воздействию реакционных деблокирующих реагентов и, соответственно, не будет потрачен впустую. Также при таком способе мечения нет необходимости использовать сверхмягкие защитные группы.

По сравнению с методом мечения активированным эфиром, клик-химия более масштабируема и требует меньшего количества красителя. Зонды очищаются легче. Избыток красителя (примерно на 0,2-0,5 экв. выше необходимого количества) практически полностью удаляется при осаждении ацетоном. Это выгодно отличает метод клик-химии от мечения активированным эфиром, при котором иногда требуется многократное осаждение для удаления избыточного красителя. Клик-химия позволяет эффективно метить сотни единиц олигонуклеотидов OD260 в одной центрифужной пробирке.

Экономическая эффективность клик-химического метода мечения сравнима с мечением амидитом и NHS эфирами.

 Амидит красителяNHS эфирКлик-химия
Чувствительный краситель
подвергается действию
деблокирующих условий
да нет нет
Масштабируемость хорошая ограниченая превосходная
Чистота сырого меченного продукта 30-90% 60-95% 95%+
Избыток красителя для мечения 10 экв. 10 экв. 1,2-1,5 экв.
Полнота мечения 98%+ 60-100% 99-100%
Свойства - простой протокол
- низкий выход олиго
- сложная очистка
- низкая стабильность амидитов
- высокая чистота
- большой избыток красителя
- неполное мечение
- высокая чистота
- небольшой избыток красителя
- высокая эффективность
- конкурентная цена

Мы предоставляем все необходимые реагенты для мечения олигонуклеотидов: амидиты алкинов (5'-концевые и Dmt-защищенные для 3'-мечения на универсальных CPG), алкин-CPG, азиды красителей и катализаторы для клик-химии. Используйте наш рекомендуемый протокол мечения олигонуклеотидов для получения оптимальных результатов!

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.