Мечение биомолекул активированными эфирами
Активированные эфиры, такие как NHS- (N-гидроксисукцинимидные), а также другие (sulfo-NHS, STP-), являются реакционноспособными производными, способными модифицировать аминогруппы биомолекул. Наиболее часто используются NHS-эфиры.
С помощью активированных эфиров часто вводят репортерные группы, такие как флуоресецентные красители. Алкины и азидогруппы могут быть также введены в состав биомолекул с помощью соответствующих активированных эфиров для того, чтобы подготовить биомолекулы к модификации через Click Chemistry.
Поскольку почти все белки и пептиды содержат аминогруппы, их модификация особенно часто проводится этим посредством активированных эфиров. Другие биомолекулы, которые могут быть помечены — амино-ДНК, олигонуклеотиды с аминолинком, и амино-содержащие сахара.
Реакция активированных эфиров с аминами проявляет существенную зависимость от pH. При низких значениях pH происходит протонирование аминогрупп, в результате чего снижается эффективность реакции. При высоких значениях существенным становится процесс гидролиза активированного эфира. Оптимальным значением pH для модификации является 8.3-8.5.
Обычно в качестве растворителя для модификации биополимеров используют воду. Поскольку многие активированные эфиры имеют низкую растворимость в воде, в качестве сорастворителя применяют диметилсульфоксид (ДМСО) или диметилформамид (ДМФ). Раствор активированного эфира в органическом растворителе прибавляют к раствору биополимера в буфере, обеспечивающем оптимальное значение pH. Диметилформамид может портиться при хранении, при этом в нем накапливается диметиламин, способный реагировать с активироваными эфирами. Поэтому ДМФ для мечения должен бытьхорошего качества (при этом он не имеет запаха диметиламина).
Мы рекомендуем следующий общий протокол для мечения активированными эфирами.
- Рассчитайте количество активированного эфира: МассаАктивированногоЭфира [мг] = 8 × МассаАмина [мг] × МолекулярнаяМассаАктивированногоЭфира [Да] / МолекулярнаяМассаАмина [Да]. Число 8 — избыток активированного эфира. Это экспериментальное значение для достижения моно-мечения, обычное для водорастворимых белков и пептидов. Во многих случаях, однако, это значение необходимо оптимизировать, так как оно зависит от структуры и растворимости белка и активированного эфира. Молекулярные массы активированных эфиров Lumiprobe могут быть найдены на страницах соответствующих продуктов. Например, чтобы пометить 3 мг BSA (молекулярная масса 69300 Да) активированным эфирам Cy5 NHS (молекулярная масса 592 Да), и получить в среднем мономеченный продукт, необходимо взять 8 × 3 мг × 592 Да / 69300 Да = 0.21 мг активированного эфира Cy5 NHS.
- Определите объем реакционной смеси. Реакцию можно проводить на любой шкале от наномолей до десятков граммов. При мечении минимальных количеств используйте минимальный объем реакции (10-20 мкл). Оптимальная конентрация белка для мечения составляет 1-10 мг на мл смеси и более.
- Растворите активированный эфир в чистом ДМФ или ДМСО (1/10 объема реакционной смеси). Для водорастворимых активированных эфиров можно использовать воду (водный раствор необходимо использовать и нельзя хранить). Растворы в безводном ДМФ можно на протяжении 1-2 месяцев при −20°C.
- Растворите амин (белок, амино-ДНК и т.д.) в буфере pH 8.3-8.5 (объем — 9/10 реакционной смеси). Можно использовать 0.1 М раствор бикарбоната натрия (NaHCO3). Альтернативные буферы — 0.1 М Трис (хотя Трис содержит аминогруппу, она является малореакционноспособной в отношении активированных эфиров), или 0.1 М фосфатный буфер с pH 8.3-8.5. Значение pH буфера наиболее важно для успеха реакции. При мечении значительных количеств веществ (когда количество активированного эфира составляет сотни миллиграмм) следует учитывать тенденцию к закислению смеси при гидролизе активированного эфира. Необходимо использовать более концентрированный буфер и следить за значением pH.
- Добавьте раствор активированного эфира к раствору амина в буфере и хорошо размешайте на вортексе. Инкубируйте на льду в течение ночи, или при комнатной температуре в течение по меньшей мере 4 часов.
- Очистите конъюгаты с помощью подходящего метода. Для макромолекул наиболее подходит гель-фильтрация. Можно использовать переосаждение или хроматографию. Органические примеси (такие как N-гидроксисукцинимид , активированный эфир и соответствующая кислота, образующаяся при гидролизе), как правило, хорошо отделаются от продукта. Для белков и нуклеиновых кислот можно использовать осаждение этанолом или ацетоном.
Related products
AF488 активированный эфир
Активированный эфир AF488 (Alexa Fluor 488) - яркого, фотостабильного и гидрофильного красителя для зеленого канала.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 11820 | 1 mg | $110.00 | 5 д | |
| 21820 | 5 mg | $290.00 | 21 д | |
| 41820 | 25 mg |
$690.00
|
21 д | |
| 51820 | 50 mg |
$1270.00
|
21 д | |
| 61820 | 100 mg |
$1990.00
|
21 д |
BDP 558/568 активированный эфир
BDP 558/568 - флуорофор с эмиссией в желтой части спектра. Как и другие красители бордипиррометеновой структуры, этот флуорофор характеризуется высоким квантовым выходом флуоресценции, высокой яркостью и отличной фотостабильностью.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 17420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 27420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 47420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 57420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 67420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP 650/665 X активированный эфир
Активированный эфир BDP 650/665 - бордипиррометенового красителя с высоким мольным коэффициентом экстинкции и квантовым выходом.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 1E420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 2E420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 4E420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 5E420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 6E420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP FL активированный эфир
Активированный эфир BDP FL, яркого и фотостабильного красителя для канала FAM. Предназначен для мечения белков и амино-ДНК по аминогруппам.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 11420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 21420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 41420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 51420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 61420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP R6G активированный эфир
BDP R6G это краситель бордипиррометенового ряда, спектры эмиссии и абсорбции которого схожи с красителем R6G
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 14420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 24420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 44420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 54420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 64420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP TR X активированный эфир
Активированный эфир BDP TR X - производное красителя BDP TR, содержащее удлиненный линкер на основе аминогексановой кислоты (C6). Длины волн поглощения и эмиссии флуоресцентного красителя близки к ROX (Texas Red). Функциональная группа подходит для конъюгации с аминогруппами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 1D420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 2D420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 4D420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 5D420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 6D420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine3 активированный эфир
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир флуоресцентного красителя Cyanine3.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 11020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 21020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 41020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 51020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 61020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine3.5 активированный эфир
Активированный сукцинимидный эфир флуоресцентного цианинового красителя Cyanine3.5.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 12020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 22020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 42020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 52020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 62020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine5 активированный эфир
Гидроксисукцинимидный эфир красителя Cyanine5 - широко распространенного флуорофора, совместимого с разнообразным оборудованием.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 13020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 23020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 43020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 53020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 63020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine5.5 активированный эфир
Активированный эфир флуорофора Cyanine5.5, имеющего эмиссию в дальнекрасной области спектра.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 17020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 27020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 47020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 57020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 67020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine7 активированный эфир
Активированный эфир флуоресцентного красителя Cyanine7 для ближней ИК-области спектра.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 15020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 25020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 45020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 55020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 65020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine7.5 активированный эфир
Активированнный эфир красителя Cyanine7.5, хорошо подходящего для неинвазивной ИК-визуализации распределения меченых белков in vivo.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 16020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 26020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 46020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 56020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 66020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
FAM активированный эфир, 6-изомер
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир 6-FAM (флуоресцеина).
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 15120 | 1 mg | $110.00 | 7 д | |
| 25120 | 5 mg | $160.00 | в наличии | |
| 45120 | 25 mg | $210.00 | в наличии | |
| 55120 | 50 mg | $270.00 | в наличии | |
| 65120 | 100 mg |
$420.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine3 активированный эфир
Водорастворимый активированный эфир красителя sulfo-Cyanine3 для мечения антител и других белков в водной среде.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 11320 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 21320 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 41320 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 51320 | 50 mg |
$695.00
|
5 д | |
| 61320 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine5 активированный эфир
Активированный эфир водорастворимого красителя sulfo-Cyanine 5 для мечения белков и других биомолекул.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 13320 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 23320 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 43320 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 53320 | 50 mg |
$695.00
|
5 д | |
| 63320 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine5.5 активированный эфир
Водорастворимый, сульфированный дальнекрасный краситель sulfo-Cyanine5.5 в форме активированного эфира.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 17320 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 27320 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
| 47320 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
| 57320 | 50 mg |
$1190.00
|
в наличии | |
| 67320 | 100 mg |
$1850.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine7 активированный эфир
Активированный эфир инфракрасного красителя sulfo-Cyanine7, имеющего хорошую растворимость в воде. Позволяет легко получать флуоресцентно меченые белки для ИК-визуализации (имэджинга) в живых организмах.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 15320 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 25320 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
| 45320 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
| 55320 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
| 65320 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine7 бис-NHS эфир
Sulfo-Cyanine7 бис-NHS эфир - бифункциональное производное водорастворимого флуоресцентного красителя ближней ИК-области, sulfo-Cyanine7. Эта молекула содержит две сложноэфирные N-гидроксисукцинимидные группы.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 153D0 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 253D0 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
| 453D0 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
| 553D0 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
| 653D0 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
TAMRA активированный эфир, 5-изомер
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир красителя TAMRA для мечения аминогрупп в белках, пептидах и модифицированных олигонуклеотидах с аминогруппами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 17120 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 27120 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 47120 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 57120 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 67120 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Азидомасляной кислоты активированный эфир
Активированный эфир азидокислоты для введения азидогруппы в состав белков и амино-ДНК для последующей конъюгации с алкинами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 53720 | 50 mg | $60.00 | в наличии | |
| 63720 | 100 mg | $95.00 | в наличии | |
| 73720 | 1 g |
по запросу
|
в наличии | |
| 83720 | 5 g |
по запросу
|
в наличии |
Алкин активированный эфир (NHS-эфир гексиновой кислоты)
Активированный эфир для введения алкиновой группы в биомолекулы для последующего их вовлечения в реакции Click Chemistry.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 41720 | 25 mg | $95.00 | 5 д | |
| 51720 | 50 mg | $180.00 | в наличии | |
| 61720 | 100 mg | $290.00 | в наличии | |
| 91720 | 1 g |
по запросу
|
в наличии |
Пентиновой кислоты активированный эфир (STP)
Активированный эфир, позволяющий вводить алкинильную группу в белки и пептиды для Click chemistry.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 30720 | 10 mg | $110.00 | в наличии | |
| 40720 | 25 mg | $210.00 | 5 д | |
| 50720 | 50 mg |
$410.00
|
5 д | |
| 60720 | 100 mg |
$695.00
|
21 д |
Пиренилмасляной кислоты активированный эфир
Активированный эфир для введения остатка пирена в биомолекулы. Пирен обладает флуоресценцией и дает эксимеры, благодаря чему его можно использовать для детекции сближения биомолекул. Пирен также является якорной группой для иммобилизации на графите.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 63520 | 100 mg | $110.00 | в наличии |
Введено некорректное число товаров для добавления.
Корзина пуста
$ 
