Мечение биомолекул активированными эфирами

Активированные эфиры, такие как NHS- (N-гидроксисукцинимидные), а также другие (sulfo-NHS, STP-), являются реакционноспособными производными, способными модифицировать аминогруппы биомолекул. Наиболее часто используются NHS-эфиры.

С помощью активированных эфиров часто вводят репортерные группы, такие как флуоресецентные красители. Алкины и азидогруппы могут быть также введены в состав биомолекул с помощью соответствующих активированных эфиров для того, чтобы подготовить биомолекулы к модификации через Click Chemistry.

Поскольку почти все белки и пептиды содержат аминогруппы, их модификация особенно часто проводится этим посредством активированных эфиров. Другие биомолекулы, которые могут быть помечены — амино-ДНК, олигонуклеотиды с аминолинком, и амино-содержащие сахара.

Реакция активированных эфиров с аминами проявляет существенную зависимость от pH. При низких значениях pH происходит протонирование аминогрупп, в результате чего снижается эффективность реакции. При высоких значениях существенным становится процесс гидролиза активированного эфира. Оптимальным значением pH для модификации является 8.3-8.5.

Обычно в качестве растворителя для модификации биополимеров используют воду. Поскольку многие активированные эфиры имеют низкую растворимость в воде, в качестве сорастворителя применяют диметилсульфоксид (ДМСО) или диметилформамид (ДМФ). Раствор активированного эфира в органическом растворителе прибавляют к раствору биополимера в буфере, обеспечивающем оптимальное значение pH. Диметилформамид может портиться при хранении, при этом в нем накапливается диметиламин, способный реагировать с активироваными эфирами. Поэтому ДМФ для мечения должен бытьхорошего качества (при этом он не имеет запаха диметиламина).

Мы рекомендуем следующий общий протокол для мечения активированными эфирами.

  1. Рассчитайте количество активированного эфира:
    МассаАктивированногоЭфира [мг] = 8 × МассаАмина [мг] × МолекулярнаяМассаАктивированногоЭфира [Да] / МолекулярнаяМассаАмина [Да].
    Число 8 — избыток активированного эфира. Это экспериментальное значение для достижения моно-мечения, обычное для водорастворимых белков и пептидов. Во многих случаях, однако, это значение необходимо оптимизировать, так как оно зависит от структуры и растворимости белка и активированного эфира. Молекулярные массы активированных эфиров Lumiprobe могут быть найдены на страницах соответствующих продуктов.
    Например, чтобы пометить 3 мг BSA (молекулярная масса 69300 Да) активированным эфирам Cy5 NHS (молекулярная масса 592 Да), и получить в среднем мономеченный продукт, необходимо взять 8 × 3 мг × 592 Да / 69300 Да = 0.21 мг активированного эфира Cy5 NHS.
  2. Определите объем реакционной смеси. Реакцию можно проводить на любой шкале от наномолей до десятков граммов. При мечении минимальных количеств используйте минимальный объем реакции (10-20 мкл). Оптимальная конентрация белка для мечения составляет 1-10 мг на мл смеси и более.
  3. Растворите активированный эфир в чистом ДМФ или ДМСО (1/10 объема реакционной смеси). Для водорастворимых активированных эфиров можно использовать воду (водный раствор необходимо использовать и нельзя хранить). Растворы в безводном ДМФ можно на протяжении 1-2 месяцев при −20°C.
  4. Растворите амин (белок, амино-ДНК и т.д.) в буфере pH 8.3-8.5 (объем — 9/10 реакционной смеси). Можно использовать 0.1 М раствор бикарбоната натрия (NaHCO3). Альтернативные буферы — 0.1 М Трис (хотя Трис содержит аминогруппу, она является малореакционноспособной в отношении активированных эфиров), или 0.1 М фосфатный буфер с pH 8.3-8.5. Значение pH буфера наиболее важно для успеха реакции.
    При мечении значительных количеств веществ (когда количество активированного эфира составляет сотни миллиграмм) следует учитывать тенденцию к закислению смеси при гидролизе активированного эфира. Необходимо использовать более концентрированный буфер и следить за значением pH.
  5. Добавьте раствор активированного эфира к раствору амина в буфере и хорошо размешайте на вортексе. Инкубируйте на льду в течение ночи, или при комнатной температуре в течение по меньшей мере 4 часов.
  6. Очистите конъюгаты с помощью подходящего метода. Для макромолекул наиболее подходит гель-фильтрация. Можно использовать переосаждение или хроматографию. Органические примеси (такие как N-гидроксисукцинимид , активированный эфир и соответствующая кислота, образующаяся при гидролизе), как правило, хорошо отделаются от продукта. Для белков и нуклеиновых кислот можно использовать осаждение этанолом или ацетоном.

Related products

AF488 активированный эфир

Активированный эфир AF488 (Alexa Fluor 488) - яркого, фотостабильного и гидрофильного красителя для зеленого канала.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11820 1 mg $110.00 в наличии
21820 5 mg $290.00 5 д
41820 25 mg $690.00 21 д
51820 50 mg $1270.00 21 д
61820 100 mg $1990.00 21 д

BDP 558/568 активированный эфир

BDP 558/568 - флуорофор с эмиссией в желтой части спектра. Как и другие красители бордипиррометеновой структуры, этот флуорофор характеризуется высоким квантовым выходом флуоресценции, высокой яркостью и отличной фотостабильностью.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17420 1 mg $110.00 в наличии
27420 5 mg $210.00 в наличии
47420 25 mg $410.00 в наличии
57420 50 mg $695.00 в наличии
67420 100 mg $1190.00 в наличии

BDP 650/665 X активированный эфир

Активированный эфир BDP 650/665 - бордипиррометенового красителя с высоким мольным коэффициентом экстинкции и квантовым выходом.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
1E420 1 mg $110.00 в наличии
2E420 5 mg $210.00 в наличии
4E420 25 mg $410.00 в наличии
5E420 50 mg $695.00 в наличии
6E420 100 mg $1190.00 в наличии

BDP FL активированный эфир

Активированный эфир BDP FL, яркого и фотостабильного красителя для канала FAM. Предназначен для мечения белков и амино-ДНК по аминогруппам.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11420 1 mg $110.00 в наличии
21420 5 mg $210.00 в наличии
41420 25 mg $410.00 в наличии
51420 50 mg $695.00 в наличии
61420 100 mg $1190.00 в наличии

BDP R6G активированный эфир

BDP R6G это краситель бордипиррометенового ряда, спектры эмиссии и абсорбции которого схожи с красителем R6G
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
14420 1 mg $110.00 в наличии
24420 5 mg $210.00 в наличии
44420 25 mg $410.00 в наличии
54420 50 mg $695.00 в наличии
64420 100 mg $1190.00 в наличии

BDP TR X активированный эфир

Активированный эфир BDP TR X - производное красителя BDP TR, содержащее удлиненный линкер на основе аминогексановой кислоты (C6). Длины волн поглощения и эмиссии флуоресцентного красителя близки к ROX (Texas Red). Функциональная группа подходит для конъюгации с аминогруппами.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
1D420 1 mg $110.00 в наличии
2D420 5 mg $210.00 в наличии
4D420 25 mg $410.00 в наличии
5D420 50 mg $695.00 в наличии
6D420 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine3 активированный эфир

Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир флуоресцентного красителя Cyanine3.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11020 1 mg $110.00 в наличии
21020 5 mg $210.00 в наличии
41020 25 mg $410.00 в наличии
51020 50 mg $695.00 в наличии
61020 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine3.5 активированный эфир

Активированный сукцинимидный эфир флуоресцентного цианинового красителя Cyanine3.5.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
12020 1 mg $110.00 в наличии
22020 5 mg $210.00 в наличии
42020 25 mg $410.00 в наличии
52020 50 mg $695.00 в наличии
62020 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine5 активированный эфир

Гидроксисукцинимидный эфир красителя Cyanine5 - широко распространенного флуорофора, совместимого с разнообразным оборудованием.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13020 1 mg $110.00 в наличии
23020 5 mg $210.00 в наличии
43020 25 mg $410.00 в наличии
53020 50 mg $695.00 в наличии
63020 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine5.5 активированный эфир

Активированный эфир флуорофора Cyanine5.5, имеющего эмиссию в дальнекрасной области спектра.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17020 1 mg $110.00 в наличии
27020 5 mg $210.00 в наличии
47020 25 mg $410.00 в наличии
57020 50 mg $695.00 в наличии
67020 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine7 активированный эфир

Активированный эфир флуоресцентного красителя Cyanine7 для ближней ИК-области спектра.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15020 1 mg $110.00 в наличии
25020 5 mg $210.00 в наличии
45020 25 mg $410.00 в наличии
55020 50 mg $695.00 в наличии
65020 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine7.5 активированный эфир

Активированнный эфир красителя Cyanine7.5, хорошо подходящего для неинвазивной ИК-визуализации распределения меченых белков in vivo.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
16020 1 mg $110.00 в наличии
26020 5 mg $210.00 в наличии
46020 25 mg $410.00 в наличии
56020 50 mg $695.00 в наличии
66020 100 mg $1190.00 в наличии

FAM активированный эфир, 6-изомер

Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир 6-FAM (флуоресцеина).
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15120 1 mg $110.00 в наличии
25120 5 mg $160.00 в наличии
45120 25 mg $210.00 в наличии
55120 50 mg $270.00 в наличии
65120 100 mg $420.00 в наличии

Sulfo-Cyanine3 активированный эфир

Водорастворимый активированный эфир красителя sulfo-Cyanine3 для мечения антител и других белков в водной среде.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11320 1 mg $110.00 в наличии
21320 5 mg $210.00 в наличии
41320 25 mg $410.00 в наличии
51320 50 mg $695.00 в наличии
61320 100 mg $1190.00 в наличии

Sulfo-Cyanine5 активированный эфир

Активированный эфир водорастворимого красителя sulfo-Cyanine 5 для мечения белков и других биомолекул.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13320 1 mg $110.00 в наличии
23320 5 mg $210.00 в наличии
43320 25 mg $410.00 в наличии
53320 50 mg $695.00 в наличии
63320 100 mg $1190.00 в наличии

Sulfo-Cyanine5.5 активированный эфир

Водорастворимый, сульфированный дальнекрасный краситель sulfo-Cyanine5.5 в форме активированного эфира.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17320 1 mg $110.00 в наличии
27320 5 mg $290.00 в наличии
47320 25 mg $690.00 в наличии
57320 50 mg $1190.00 в наличии
67320 100 mg $1850.00 в наличии

Sulfo-Cyanine7 активированный эфир

Активированный эфир инфракрасного красителя sulfo-Cyanine7, имеющего хорошую растворимость в воде. Позволяет легко получать флуоресцентно меченые белки для ИК-визуализации (имэджинга) в живых организмах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15320 1 mg $110.00 в наличии
25320 5 mg $290.00 в наличии
45320 25 mg $690.00 в наличии
55320 50 mg $1270.00 в наличии
65320 100 mg $1990.00 в наличии

Sulfo-Cyanine7 бис-NHS эфир

Sulfo-Cyanine7 бис-NHS эфир - бифункциональное производное водорастворимого флуоресцентного красителя ближней ИК-области, sulfo-Cyanine7. Эта молекула содержит две сложноэфирные N-гидроксисукцинимидные группы.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
153D0 1 mg $110.00 21 д
253D0 5 mg $290.00 21 д
453D0 25 mg $690.00 21 д
553D0 50 mg $1270.00 21 д
653D0 100 mg $1990.00 21 д

TAMRA активированный эфир, 5-изомер

Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир красителя TAMRA для мечения аминогрупп в белках, пептидах и модифицированных олигонуклеотидах с аминогруппами.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17120 1 mg $110.00 в наличии
27120 5 mg $210.00 в наличии
47120 25 mg $410.00 в наличии
57120 50 mg $695.00 в наличии
67120 100 mg $1190.00 в наличии

Азидомасляной кислоты активированный эфир

Активированный эфир азидокислоты для введения азидогруппы в состав белков и амино-ДНК для последующей конъюгации с алкинами.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
53720 50 mg $60.00 5 д
63720 100 mg $95.00 в наличии
73720 1 g по запросу в наличии
83720 5 g по запросу в наличии

Алкин активированный эфир (NHS-эфир гексиновой кислоты)

Активированный эфир для введения алкиновой группы в биомолекулы для последующего их вовлечения в реакции Click Chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
41720 25 mg $95.00 в наличии
51720 50 mg $180.00 в наличии
61720 100 mg $290.00 в наличии
91720 1 g по запросу в наличии

Пентиновой кислоты активированный эфир (STP)

Активированный эфир, позволяющий вводить алкинильную группу в белки и пептиды для Click chemistry.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
30720 10 mg $110.00 в наличии
40720 25 mg $210.00 в наличии
50720 50 mg $410.00 в наличии
60720 100 mg $695.00 5 д

Пиренилмасляной кислоты активированный эфир

Активированный эфир для введения остатка пирена в биомолекулы. Пирен обладает флуоресценцией и дает эксимеры, благодаря чему его можно использовать для детекции сближения биомолекул. Пирен также является якорной группой для иммобилизации на графите.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
63520 100 mg $110.00 в наличии

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.