Мечение активированными эфирами биомолекул, содержащих первичные аминогруппы
Активированные эфиры, такие как NHS- (N-гидроксисукцинимидные), а также другие (sulfo-NHS, STP-), являются реакционноспособными производными, способными модифицировать аминогруппы биомолекул. Наиболее часто используются NHS-эфиры.
С помощью активированных эфиров часто вводят репортерные группы, такие как флуоресецентные красители. Алкины и азидогруппы могут быть также введены в состав биомолекул с помощью соответствующих активированных эфиров для того, чтобы подготовить биомолекулы к модификации через клик-реакции.
Поскольку почти все белки и пептиды содержат аминогруппы, их модификация особенно часто проводится посредством активированных эфиров. Другими примерами являются модификации аминоолигонуклеотидов, аминомодифицированная ДНК и аминосодержащие сахара.
Реакция активированных эфиров с аминами проявляет существенную зависимость от pH. При низких значениях pH происходит протонирование аминогрупп, в результате чего снижается эффективность реакции. При рН выше оптимального гидролиз активированного эфира происходит слишком быстро, и выход модифицированной молекулы снижается. Оптимальным значением pH для модификации является 8.3-8.5.
Обычно в качестве растворителя для модификации биополимеров используют воду. Поскольку многие активированные эфиры имеют низкую растворимость в воде, в качестве сорастворителя применяют диметилсульфоксид (ДМСО) или диметилформамид (ДМФ). Раствор активированного эфира в органическом растворителе прибавляют к раствору биополимера в буфере, обеспечивающем оптимальное значение pH. Диметилформамид при хранении может разлагаться до диметиламина, который имеет рыбный запах и способен реагировать с активированными эфирами. Поэтому для мечения важно использовать высококачественный ДМФ, не содержащий диметиламина и не имеющий рыбного запаха.
Мы рекомендуем следующий общий протокол для мечения активированными эфирами от Lumiprobe:
- Рассчитайте необходимое количество активированного эфира, используя приведенную ниже формулу или наш калькулятор мечения белков: МассаАктивированногоЭфира [мг] = 8 × МассаАмина [мг] × МолекулярнаяМассаАктивированногоЭфира [Да] / МолекулярнаяМассаАмина [Да]. Число 8 — избыток активированного эфира. Это экспериментальное значение для достижения моно-мечения, обычное для водорастворимых белков и пептидов. Во многих случаях, однако, это значение необходимо оптимизировать, так как оно зависит от структуры и растворимости белка и активированного эфира. Молекулярные массы активированных эфиров Lumiprobe могут быть найдены на страницах соответствующих продуктов. Например, чтобы пометить 3 мг BSA (молекулярная масса 66500 Да) активированным эфиром Cy5 NHS (молекулярная масса 616 Да), и получить в среднем мономеченный продукт, необходимо взять 8 × 3 мг × 616 Да / 66500 Да = 0.22 мг активированного эфира Cy5 NHS.
- Определите объем реакционной смеси. Реакцию можно проводить на любой шкале от наномолей до десятков граммов. При мечении минимальных количеств используйте минимальный объем реакции (10-20 мкл). Оптимальная концентрация белка для мечения составляет 1-10 мг на мл смеси и более.
- Растворите активированный эфир в 1/10 реакционного объема воды, ДМФ или ДМСО. Вода или ДМФ, не содержащий диметиламина, являются предпочтительными растворителями. Активированные эфиры, растворенные в ДМФ, могут храниться в растворе в течение 1-2 месяцев при −20°C. Водные растворы NHS-эфиров следует использовать сразу после приготовления.
- Растворите амин (белок, амино-ДНК и т.д.) в буфере с pH 8.3-8.5 объемом 9/10 реакционной смеси. Обычно используют 0.1 М раствор бикарбоната натрия (NaHCO3). В качестве альтернативы можно использовать 0.1 М фосфатный буфер. Значение pH буфера наиболее важно для качества реакции. Избегайте использования буферов, содержащих амины. Можно использовать буферы на основе Tris, однако это не рекомендуется, поскольку Tris содержит аминогруппу (хотя ее сродство к активированным сложным эфирам незначительно). При мечении значительных количеств веществ (когда количество активированного эфира составляет сотни миллиграмм) следует учитывать тенденцию к закислению смеси при гидролизе активированного эфира. Необходимо использовать более концентрированный буфер и следить за значением pH.
- Добавьте раствор активированного эфира к раствору амина в буфере и хорошо размешайте на вортексе. Инкубируйте на льду в течение ночи, или при комнатной температуре в течение от 1 до 4 часов.
- Очистите конъюгаты с помощью подходящего метода. Для макромолекул наиболее подходит гель-фильтрация. Можно использовать переосаждение или хроматографию. Для белков и нуклеиновых кислот можно использовать осаждение этанолом или ацетоном. Органические примеси (такие как N-гидроксисукцинимид , активированный эфир и соответствующая кислота, образующаяся при гидролизе), как правило, хорошо отделяются от продукта.
Похожие товары
3-Малеимидпропионовой кислоты NHS-эфир
Бифункциональный сшивающий агент, содержащий гидроксисукцинимидную (NHS), и малеимидную группы для конъюгации с аминами и тиолами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 3419-100mg | 100 mg | – | в наличии | |
| 3419-500mg | 500 mg | $110 | в наличии |
AF 488 TFP-эфир
Активированный тетрафторфениловый эфир зеленого флуоресцентного красителя AF 488 для мечения аминогрупп в белках, пептидах и модифицированных олигонуклеотидах.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 118T0 | 1 mg | $165 | в наличии | |
| 218T0 | 5 mg |
$510
|
в наличии | |
| 418T0 | 25 mg |
$1650
|
5 д |
ATFB SE (4-азидо-2,3,5,6-тетрафторбензойной кислоты NHS-эфир)
N-сукцинимидил-4-азидо-2,3,5,6-тетрафторбензоат (ATFB SE, ATFB-OSu) представляет собой фотоактивируемый линкер, используемый в качестве универсального маркирующего агента для исследования биологических рецепторов.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2574-250mg | 250 mg | $134 | в наличии | |
| 2574-1g | 1 g |
$419
|
в наличии |
ATT 550 NHS эфир
Водорастворимый сукцинимидный эфир красителя ATT 550 для мечения белков, пептидов и других аминосодержащих молекул.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 1C920 | 1 mg | $110 | в наличии | |
| 2C920 | 5 mg |
$640
|
в наличии | |
| 4C920 | 25 mg |
$1640
|
в наличии | |
| 5C920 | 50 mg |
$2090
|
в наличии | |
| 6C920 | 100 mg |
$2840
|
в наличии |
BDP 564/570 NHS-эфир
Липофильный бордипиррометеновый краситель с эмиссией в оранжевой области для конъюгации с аминогруппами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 1H420 | 1 mg | $125 | в наличии | |
| 2H420 | 5 mg | $325 | в наличии | |
| 4H420 | 25 mg |
$510
|
в наличии | |
| 5H420 | 50 mg |
$895
|
в наличии | |
| 6H420 | 100 mg |
$1490
|
в наличии |
BDP® R6G NHS-эфир
BDP R6G это краситель бордипиррометенового ряда, спектры эмиссии и абсорбции которого схожи с красителем R6G
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 14420 | 1 mg | $125 | в наличии | |
| 24420 | 5 mg | $260 | в наличии | |
| 44420 | 25 mg |
$510
|
в наличии | |
| 54420 | 50 mg |
$895
|
в наличии | |
| 64420 | 100 mg |
$1490
|
в наличии |
BDP® TMR-X-NHS эфир
Производное красителя BDP TMR, яркого флуорофора для канала TAMRA, идеально подходящего для флуоресцентно-поляризационного анализа. Данное соединение содержит линкер на основе аминогексановой кислоты (C6) между красителем и функциональной группой.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 1F420 | 1 mg | $125 | в наличии | |
| 2F420 | 5 mg | $260 | в наличии | |
| 4F420 | 25 mg |
$510
|
в наличии | |
| 5F420 | 50 mg |
$895
|
в наличии | |
| 6F420 | 100 mg |
$1490
|
в наличии |
DOTA-NHS-эфир
Бифункциональный линкер с хелатирующей группой и NHS-эфиром для конъюгации с аминосодержащими биомолекулами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 4245-100mg | 100 mg | $125 | в наличии | |
| 4245-500mg | 500 mg |
$525
|
в наличии | |
| 4245-1g | 1 g |
$990
|
в наличии |
DOTA-tris-tBu mono-NHS эфир
Бифункциональный линкер с хелатирующей группой и NHS-эфиром для конъюгации с аминосодержащими биомолекулами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2782-100mg | 100 mg | $110 | в наличии | |
| 2782-500mg | 500 mg |
$485
|
в наличии | |
| 2782-1g | 1 g |
$895
|
в наличии |
DusQ 1 NHS-эфир
Функционализированное производное с DusQ 1, тушителем в диапазоне 480 - 580 нм, для мечения биомолекул c первичными амино-группами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 21D20 | 5 mg | – | в наличии | |
| 41D20 | 25 mg | $315 | в наличии | |
| 51D20 | 50 mg |
$580
|
в наличии | |
| 61D20 | 100 mg |
$885
|
в наличии |
DusQ® 21 NHS-эфир
Производное, содержащее N-гидроксисукцинимид и тушитель DusQ® 21 - диапазон поглощения 590- 720 нм, для конъюгирования с биомолекулами, содержащими первичные амины.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 28D20 | 5 mg | – | в наличии | |
| 48D20 | 25 mg | $315 | в наличии | |
| 68D20 | 100 mg |
$885
|
в наличии |
DusQ® 2 NHS-эфир
DusQ® 2 тушитель на основе азопроизводного, эффективно поглощает в диапазоне 560 - 670 нм, для конъюгации с амин-содержащими биомолекулами, подходит для синтеза зондов.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 22D20 | 5 mg | – | в наличии | |
| 42D20 | 25 mg | $315 | в наличии | |
| 52D20 | 50 mg |
$580
|
в наличии | |
| 62D20 | 100 mg |
$885
|
в наличии |
DusQ® 3 NHS-эфир
NHS активированный эфир для мечения биомолекул по амино-группам тушителем DusQ® 3, акцептором в дальней красной области спектра.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 23D20 | 5 mg | – | в наличии | |
| 43D20 | 25 mg | $315 | в наличии | |
| 53D20 | 50 mg |
$580
|
в наличии | |
| 63D20 | 100 mg |
$885
|
в наличии |
HEX NHS-эфир, 6-изомер
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир красителя HEX для мечения аминогрупп в белках, пептидах и модифицированных олигонуклеотидах.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2B220 | 5 mg | $175 | в наличии |
JOE NHS-эфир, 5-изомер
JOE - флуоресцентный краситель с эмиссией в желтой области спектра. Это производное - активированный эфир для конъюгации с аминами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 11120 | 1 mg | $110 | в наличии | |
| 21120 | 5 mg | $210 | в наличии | |
| 41120 | 25 mg |
$410
|
в наличии | |
| 51120 | 50 mg |
$695
|
в наличии | |
| 61120 | 100 mg |
$1190
|
в наличии |
sulfo-Cyanine3.5 NHS-эфир
Активированный эфир водорастворимого красителя sulfo-Cyanine3.5 для конъюгации с аминогруппами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 12320 | 1 mg | $125 | в наличии | |
| 22320 | 5 mg | $325 | в наличии | |
| 42320 | 25 mg |
$850
|
в наличии | |
| 52320 | 50 mg |
$1490
|
в наличии | |
| 62320 | 100 mg |
$1990
|
в наличии |
sulfo-Cyanine5 NHS-эфир
Активированный эфир водорастворимого красителя sulfo-Cyanine 5 для мечения белков и других биомолекул.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 13320 | 1 mg | $91 | в наличии | |
| 23320 | 5 mg | $119 | в наличии | |
| 43320 | 25 mg | $345 | в наличии | |
| 53320 | 50 mg |
$557
|
в наличии | |
| 63320 | 100 mg |
$890
|
в наличии |
TAMRA NHS-эфир, 6-изомер
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир красителя TAMRA для мечения аминогрупп в белках, пептидах и модифицированных олигонуклеотидах с аминогруппами. Чистый 6-изомер.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 18120 | 1 mg | $110 | в наличии | |
| 28120 | 5 mg | $210 | в наличии | |
| 48120 | 25 mg | $350 | в наличии | |
| 58120 | 50 mg |
$595
|
в наличии | |
| 68120 | 100 mg |
$790
|
в наличии |
TR-X-NHS-эфир, 5-изомер
TR - краситель с эмиссией в красной области, NHS-эфир для мечения аминогрупп.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 1V220 | 1 mg | $125 | в наличии | |
| 2V220 | 5 mg | $325 | в наличии | |
| 4V220 | 25 mg |
$510
|
в наличии | |
| 5V220 | 50 mg |
$895
|
в наличии | |
| 6V220 | 100 mg |
$1490
|
в наличии |
Азидомасляной кислоты NHS-эфир
Активированный эфир азидокислоты для введения азидогруппы в состав белков и амино-ДНК для последующей конъюгации с алкинами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 53720 | 50 mg | $110 | в наличии | |
| 63720 | 100 mg | $210 | в наличии | |
| 73720 | 1 g |
$950
|
в наличии | |
| 83720 | 5 g | по запросу | в наличии |
Азид-ПЭГ6-NHS-эфир
Гидрофильный бифункциональный линкер, содержащий ПЭГ6 (гексаэтиленгликоль) в качестве спейсера, и концевые азидогруппу и гидроксисукцинимидную (NHS) группу.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 3692-250mg | 250 mg | $325 | 5 д | |
| 3692-1g | 1 g |
$539
|
5 д |
Алкин-ПЭГ2-NHS-эфир
Бифункциональный гидрофильный линкер на основе диэтиленгликоля (ПЭГ2) с терминальной алкинильной группой и фрагментом NHS-эфира.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2219-1g | 1 g |
$450
|
в наличии | |
| 2219-5g | 5 g |
$980
|
в наличии |
Алкин-ПЭГ3-NHS-эфир
Бифункциональный гидрофильный линкер на основе триэтиленгликоля (ПЭГ3) с терминальной алкинильной группой и фрагментом NHS-эфира.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2298-1g | 1 g |
$490
|
в наличии | |
| 2298-5g | 5 g |
$980
|
в наличии |
Алкин-ПЭГ4-NHS-эфир
Бифункциональный гидрофильный линкер на основе тетраэтиленгликоля (ПЭГ4) с терминальной алкинильной группой и фрагментом NHS-эфира.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2409-100mg | 100 mg | $250 | в наличии | |
| 2409-1g | 1 g |
$790
|
в наличии |
Биотин-XX-NHS-эфир
Биотин-содержащее производное с удлиненным спейсером для уменьшения стерических затруднений при конъюгировании с аминокислотами, пептидами или белками путем ковалентного связывания с первичными аминами.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2897-100mg | 100 mg | $225 | в наличии | |
| 2897-1g | 1 g |
$670
|
в наличии |
Биотин-ПЭГ4-NHS-эфир
Активированный эфир с полиэтиленгликольным (ПЭГ4) спейсером для простого и эффективного биотинилирования антител, белков и других биомолекул, содержащих первичные амины.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2893-100mg | 100 mg | $145 | в наличии | |
| 2893-1g | 1 g |
$590
|
в наличии |
Гексиновой кислоты NHS-эфир
Активированный эфир для введения алкиновой группы в биомолекулы для последующего их вовлечения в клик-реакции.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 41720 | 25 mg | $95 | в наличии | |
| 51720 | 50 mg | $180 | в наличии | |
| 61720 | 100 mg | $290 | в наличии | |
| 91720 | 1 g | по запросу | в наличии |
Гексиновой кислоты STP-эфир
Активированный эфир с терминальной алкинильной группой для модификации соединений, содержащих аминогруппу. STP-эфиры являются отличной альтернативой NHS-эфирам.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 569-25mg | 25 mg | $95 | в наличии | |
| 569-100mg | 100 mg | $185 | в наличии | |
| 569-500mg | 500 mg |
$850
|
в наличии |
ДБЦО-NHS-эфир
Реагент, содержащий азодибензоциклооктин (ДБЦО, или АДИБО), для реакций безмедной клик-химии. Реагент содержит остаток N-гидроксисукцинимида (NHS) для присоединения циклооктинового фрагмента к различным молекулам.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 34720 | 10 mg | $80 | в наличии | |
| 44720 | 25 mg | $110 | в наличии | |
| 54720 | 50 mg | $135 | 5 д | |
| 64720 | 100 mg |
$210
$178
|
в наличии | |
| 94720 | 1 g |
$1000
$970
|
в наличии | |
| K4720 | 5 g |
$3570
$2990
|
в наличии |
ДБЦО-STP-эфир
Эфир для модификации белков/антител/пептидов для последующего введения в безмедную клик-реакцию.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 2584-5mg | 5 mg | – | в наличии | |
| 2584-10mg | 10 mg | $90 | в наличии | |
| 2584-25mg | 25 mg | $180 | в наличии | |
| 2584-100mg | 100 mg |
$450
|
в наличии | |
| 2584-500mg | 500 mg |
$1700
|
в наличии | |
| 2584-1g | 1 g |
$3000
|
в наличии | |
| 2584-5g | 5 g | по запросу | в наличии |
ДБЦО-ПЭГ6-NHS-эфир
Гетеробифункциональный линкер, содержащий ДБЦО и N-гидроксисукцинимид на концах цепи ПЭГ6 (гексаэтиленгликоля).
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 3664-10mg | 10 mg | – | в наличии | |
| 3664-50mg | 50 mg | $247 | в наличии | |
| 3664-100mg | 100 mg |
$449
|
в наличии | |
| 3664-1g | 1 g |
$3490
|
5 д |
Дисукцинимидилглутарат (DSG)
Гомобифункциональный сшивающий агент, содержащий две эфирные группы N-гидроксисукцинимида (NHS) на каждом конце короткого 5-атомного (7,7 ангстрем) спейсера.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 4018-100mg | 100 mg | $95 | в наличии | |
| 4018-1g | 1 g |
$410
|
в наличии |
Пентиновой кислоты STP-эфир
Активированный эфир, позволяющий вводить алкинильную группу в белки и пептиды для клик-реакции.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 30720 | 10 mg | $110 | в наличии | |
| 40720 | 25 mg | $210 | в наличии | |
| 50720 | 50 mg |
$410
|
в наличии | |
| 60720 | 100 mg |
$595
|
10 д |
ТЦО-ПЭГ4-NHS эфир (аксиальный изомер)
Гетеробифункциональный линкер, содержащий спейсер ПЭГ4, транс-циклооктен и гидроксисукцинимидную (NHS) группу, для мечения антител, белков и других биомолекул, содержащих первичные амины.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 3056-10mg | 10 mg | $145 | в наличии | |
| 3056-25mg | 25 mg | $225 | в наличии | |
| 3056-100mg | 100 mg |
$550
|
в наличии |
Экзо-BCN-PNP
BCN-PNP представляет собой инструмент для введения фрагмента BCN.
Показать цены
| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 4043-100mg | 100 mg | $280 | в наличии | |
| 4043-500mg | 500 mg |
$990
|
в наличии |
Введено некорректное число товаров для добавления.
Корзина пуста
$ 
