Мечение биомолекул активированными эфирами
Активированные эфиры, такие как NHS- (N-гидроксисукцинимидные), а также другие (sulfo-NHS, STP-), являются реакционноспособными производными, способными модифицировать аминогруппы биомолекул. Наиболее часто используются NHS-эфиры.
С помощью активированных эфиров часто вводят репортерные группы, такие как флуоресецентные красители. Алкины и азидогруппы могут быть также введены в состав биомолекул с помощью соответствующих активированных эфиров для того, чтобы подготовить биомолекулы к модификации через Click Chemistry.
Поскольку почти все белки и пептиды содержат аминогруппы, их модификация особенно часто проводится посредством активированных эфиров. Другие биомолекулы, которые могут быть помечены — амино-ДНК, олигонуклеотиды с аминолинком, и амино-содержащие сахара.
Реакция активированных эфиров с аминами проявляет существенную зависимость от pH. При низких значениях pH происходит протонирование аминогрупп, в результате чего снижается эффективность реакции. При высоких значениях существенным становится процесс гидролиза активированного эфира. Оптимальным значением pH для модификации является 8.3-8.5.
Обычно в качестве растворителя для модификации биополимеров используют воду. Поскольку многие активированные эфиры имеют низкую растворимость в воде, в качестве сорастворителя применяют диметилсульфоксид (ДМСО) или диметилформамид (ДМФ). Раствор активированного эфира в органическом растворителе прибавляют к раствору биополимера в буфере, обеспечивающем оптимальное значение pH. Диметилформамид может портиться при хранении, при этом в нем накапливается диметиламин, способный реагировать с активироваными эфирами. Поэтому ДМФ для мечения должен бытьхорошего качества (при этом он не имеет запаха диметиламина).
Мы рекомендуем следующий общий протокол для мечения активированными эфирами.
- Рассчитайте количество активированного эфира: МассаАктивированногоЭфира [мг] = 8 × МассаАмина [мг] × МолекулярнаяМассаАктивированногоЭфира [Да] / МолекулярнаяМассаАмина [Да]. Число 8 — избыток активированного эфира. Это экспериментальное значение для достижения моно-мечения, обычное для водорастворимых белков и пептидов. Во многих случаях, однако, это значение необходимо оптимизировать, так как оно зависит от структуры и растворимости белка и активированного эфира. Молекулярные массы активированных эфиров Lumiprobe могут быть найдены на страницах соответствующих продуктов. Например, чтобы пометить 3 мг BSA (молекулярная масса 69300 Да) активированным эфиром Cy5 NHS (молекулярная масса 592 Да), и получить в среднем мономеченный продукт, необходимо взять 8 × 3 мг × 592 Да / 69300 Да = 0.21 мг активированного эфира Cy5 NHS.
- Определите объем реакционной смеси. Реакцию можно проводить на любой шкале от наномолей до десятков граммов. При мечении минимальных количеств используйте минимальный объем реакции (10-20 мкл). Оптимальная концентрация белка для мечения составляет 1-10 мг на мл смеси и более.
- Растворите активированный эфир в чистом ДМФ или ДМСО (1/10 объема реакционной смеси). Для водорастворимых активированных эфиров можно использовать воду (водный раствор необходимо использовать и нельзя хранить). Растворы в безводном ДМФ можно на протяжении 1-2 месяцев при −20°C.
- Растворите амин (белок, амино-ДНК и т.д.) в буфере pH 8.3-8.5 (объем — 9/10 реакционной смеси). Можно использовать 0.1 М раствор бикарбоната натрия (NaHCO3). Альтернативные буферы — 0.1 М Трис (хотя Трис содержит аминогруппу, она является малореакционноспособной в отношении активированных эфиров), или 0.1 М фосфатный буфер с pH 8.3-8.5. Значение pH буфера наиболее важно для успеха реакции. При мечении значительных количеств веществ (когда количество активированного эфира составляет сотни миллиграмм) следует учитывать тенденцию к закислению смеси при гидролизе активированного эфира. Необходимо использовать более концентрированный буфер и следить за значением pH.
- Добавьте раствор активированного эфира к раствору амина в буфере и хорошо размешайте на вортексе. Инкубируйте на льду в течение ночи, или при комнатной температуре в течение по меньшей мере 4 часов.
- Очистите конъюгаты с помощью подходящего метода. Для макромолекул наиболее подходит гель-фильтрация. Можно использовать переосаждение или хроматографию. Органические примеси (такие как N-гидроксисукцинимид , активированный эфир и соответствующая кислота, образующаяся при гидролизе), как правило, хорошо отделяются от продукта. Для белков и нуклеиновых кислот можно использовать осаждение этанолом или ацетоном.
Related products
AF430 активированный эфир
AF430 - гидрофильный кумариновый краситель с эмиссией в желто-зеленой области спектра. Реакционноспособный фрагмент активированного эфира идеально подходит для конъюгации с аминогруппами.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
10820 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
20820 | 5 mg | $165.00 | в наличии | |
40820 | 25 mg | $380.00 | в наличии | |
50820 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
60820 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
AF488 активированный эфир
Активированный эфир AF488 - яркий, фотостабильный и гидрофильный краситель для зеленого канала.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
11820 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
21820 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
41820 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
51820 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
61820 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
AF568 активированный эфир
Производное AF568 для мечения белков и других высоко- и низкомолекулярных лигандов, имеющих в составе молекулы свободные амины.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
14820 | 1 mg | $110.00 | 5 д | |
24820 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
44820 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
54820 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
64820 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
AF647 активированный эфир
Яркий, водорастворимый сукцинимидный эфир AF647 для мечения белков и антител.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
16820 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
26820 | 5 mg | $340.00 | в наличии | |
46820 | 25 mg |
$1100.00
|
5 д | |
56820 | 50 mg |
$1890.00
|
в наличии | |
66820 | 100 mg |
$2990.00
|
в наличии |
BDP 558/568 активированный эфир
BDP 558/568 - флуорофор с эмиссией в желтой части спектра. Как и другие красители бордипиррометеновой структуры, этот флуорофор характеризуется высоким квантовым выходом флуоресценции, высокой яркостью и отличной фотостабильностью.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
17420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
27420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
47420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
57420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
67420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP 564/570 активированный эфир
Липофильный бордипиррометеновый краситель с эмиссией в оранжевой области для конъюгации с аминогруппами.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
1H420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
2H420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
4H420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
5H420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
6H420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP 576/589 активированный эфир
Активированный эфир BDP 576/589 (аналог BODIPY™ 576/589) – яркого гидрофобного красителя с эмиссией в оранжевой области спектра. Подходит для исследований на основе анизотропии флуоресценции.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
1G420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
2G420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
4G420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
5G420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
6G420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP 650/665 X активированный эфир
Активированный эфир BDP 650/665 - бордипиррометенового красителя с высоким мольным коэффициентом экстинкции и квантовым выходом.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
1E420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
2E420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
4E420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
5E420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
6E420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP FL активированный эфир
Активированный эфир BDP FL, яркого и фотостабильного красителя для канала FAM. Предназначен для мечения белков и амино-ДНК по аминогруппам.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
11420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
21420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
41420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
51420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
61420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP R6G активированный эфир
BDP R6G это краситель бордипиррометенового ряда, спектры эмиссии и абсорбции которого схожи с красителем R6GАртикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
14420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
24420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
44420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
54420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
64420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP TR X активированный эфир
Активированный эфир BDP TR X - производное красителя BDP TR, содержащее удлиненный линкер на основе аминогексановой кислоты (C6). Длины волн поглощения и эмиссии флуоресцентного красителя близки к ROX. Функциональная группа подходит для конъюгации с аминогруппами.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
1D420 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
2D420 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
4D420 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
5D420 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
6D420 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine3.5 активированный эфир
Активированный сукцинимидный эфир флуоресцентного цианинового красителя Cyanine3.5.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
12020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
22020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
42020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
52020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
62020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine3 активированный эфир
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир флуоресцентного красителя Cyanine3.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
11020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
21020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
41020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
51020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
61020 | 100 mg |
$1190.00
|
5 д |
Cyanine5.5 активированный эфир
Активированный эфир флуорофора Cyanine5.5, имеющего эмиссию в дальнекрасной области спектра.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
17020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
27020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
47020 | 25 mg |
$410.00
|
5 д | |
57020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
67020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine5 активированный эфир
Гидроксисукцинимидный эфир красителя Cyanine5 - широко распространенного флуорофора, совместимого с разнообразным оборудованием.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
13020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
23020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
43020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
53020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
63020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine7.5 активированный эфир
Активированнный эфир красителя Cyanine7.5, хорошо подходящего для неинвазивной ИК-визуализации распределения меченых белков in vivo.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
16020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
26020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
46020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
56020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
66020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine7 активированный эфир
Активированный эфир флуоресцентного красителя Cyanine7 для ближней ИК-области спектра.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
15020 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
25020 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
45020 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
55020 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
65020 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
FAM активированный эфир, 6-изомер
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир 6-FAM (флуоресцеина).Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
25120 | 5 mg | – | 8 д | |
45120 | 25 mg | $140.00 | в наличии | |
55120 | 50 mg | $240.00 | в наличии | |
65120 | 100 mg | $370.00 | в наличии | |
85120 | 1 g |
по запросу
|
в наличии | |
95120 | 5 g |
по запросу
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine3 активированный эфир
Водорастворимый активированный эфир красителя sulfo-Cyanine3 для мечения антител и других белков в водной среде.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
11320 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
21320 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
41320 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
51320 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
61320 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine5.5 активированный эфир
Водорастворимый, сульфированный дальнекрасный краситель sulfo-Cyanine5.5 в форме активированного эфира.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
17320 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
27320 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
47320 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
57320 | 50 mg |
$1190.00
|
в наличии | |
67320 | 100 mg |
$1850.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine5 активированный эфир
Активированный эфир водорастворимого красителя sulfo-Cyanine 5 для мечения белков и других биомолекул.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
13320 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
23320 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
43320 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
53320 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
63320 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine7 активированный эфир
Активированный эфир инфракрасного красителя sulfo-Cyanine7, имеющего хорошую растворимость в воде. Позволяет легко получать флуоресцентно меченые белки для ИК-визуализации (имэджинга) в живых организмах.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
15320 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
25320 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
45320 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
55320 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
65320 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine7 бис-NHS эфир
Sulfo-Cyanine7 бис-NHS эфир - бифункциональное производное водорастворимого флуоресцентного красителя ближней ИК-области, sulfo-Cyanine7. Эта молекула содержит две сложноэфирные N-гидроксисукцинимидные группы.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
153D0 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
253D0 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
453D0 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
553D0 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
653D0 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
TAMRA активированный эфир, 5-изомер
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир красителя TAMRA для мечения аминогрупп в белках, пептидах и модифицированных олигонуклеотидах с аминогруппами.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
17120 | 1 mg | – | в наличии | |
27120 | 5 mg | $110.00 | 5 д | |
47120 | 25 mg | $220.00 | 5 д | |
57120 | 50 mg | $395.00 | в наличии | |
67120 | 100 mg |
$480.00
|
в наличии |
TAMRA активированный эфир, 6-изомер
Активированный N-гидроксисукцинимидный эфир красителя TAMRA для мечения аминогрупп в белках, пептидах и модифицированных олигонуклеотидах с аминогруппами.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
18120 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
28120 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
48120 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
58120 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
68120 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Азидомасляной кислоты активированный эфир
Активированный эфир азидокислоты для введения азидогруппы в состав белков и амино-ДНК для последующей конъюгации с алкинами.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
53720 | 50 mg | $60.00 | в наличии | |
63720 | 100 mg | $95.00 | в наличии | |
73720 | 1 g |
по запросу
|
5 д | |
83720 | 5 g |
по запросу
|
в наличии |
Активированный эфир R6G, 5-изомер
Активированный эфир R6G (родамина 6G), чистый 5-изомер. Этот краситель часто используется в синтезе олигонуклеотидных зондов для ПЦР режима реального времени.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
14220 | 1 mg | $110.00 | 8 д | |
24220 | 5 mg | $210.00 | 7 д | |
44220 | 25 mg |
$410.00
|
8 д | |
54220 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
64220 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Активированный эфир гексиновой кислоты (STP-эфир)
Активированный эфир с терминальной алкинильной группой для модификации соединений, содержащих аминогруппу. STP-эфиры являются отличной альтернативой NHS-эфирам.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
569-25mg | 25 mg | $95.00 | в наличии | |
569-100mg | 100 mg | $185.00 | в наличии | |
569-500mg | 500 mg |
$850.00
|
в наличии |
Активированный эфир пентиновой кислоты (STP)
Активированный эфир, позволяющий вводить алкинильную группу в белки и пептиды для Click chemistry.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
30720 | 10 mg | $110.00 | в наличии | |
40720 | 25 mg | $210.00 | в наличии | |
50720 | 50 mg |
$410.00
|
в наличии | |
60720 | 100 mg |
$695.00
|
8 д |
Алкин активированный эфир (NHS-эфир гексиновой кислоты)
Активированный эфир для введения алкиновой группы в биомолекулы для последующего их вовлечения в реакции Click Chemistry.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
41720 | 25 mg | $95.00 | 5 д | |
51720 | 50 mg | $180.00 | в наличии | |
61720 | 100 mg | $290.00 | в наличии | |
91720 | 1 g |
по запросу
|
в наличии |
Пиренилмасляной кислоты активированный эфир
Активированный эфир для введения остатка пирена в биомолекулы. Пирен обладает флуоресценцией и дает эксимеры, благодаря чему его можно использовать для детекции сближения биомолекул. Пирен также является якорной группой для иммобилизации на графите.Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
---|---|---|---|---|
63520 | 100 mg | $110.00 | 5 д |
