Protocol: Maleimide labeling of proteins and other thiolated biomolecules
Reaction of thiols with maleimides is a process which is widely used for bioconjugation and labeling of biomolecules including proteins and peptides. It proceeds according to the following scheme:
Maleimides are electrophilic compounds which show high selectivity towards thiols. While maleimides hardly ever occur in nature, thiols are very abundant. They are encountered in proteins and peptides as cysteine residues. Although natural DNA does not contain thiols, synthetic oligonucleotides with thiol groups can be easily prepared.
Thiols are prone to oxidative dimerization with the formation of disulfide bonds. Cysteine residues thus form disulfide bridges, which stabilize protein tertiary structures. Disulfides do not react with maleimides. Therefore, it is necessary to reduce disulfides prior to the conjugation, and to exclude oxygen from the reaction.
Conjugation protocol depends on the solubility of the starting components. For compounds with low aqueous solubility, like most fluorescent dye maleimides, use of organic co-solvent, such as DMSO or DMF, is essential.
We recommend the following protocol for the conjugation of Lumiprobe dye maleimides with proteins, peptides, and other thiolated biomolecules.
- Dissolve the protein or other molecule containing thiol to be labeled in degassed buffer (PBS, Tris, HEPES are good, although others buffers containing no thiols can be used) at pH 7-7.5 in plastic vial. Buffer can be degassed by applying vacuum on it for several minutes, or by bubbling through inert gas (nitrogen, argon, or helium). For proteins, good concentration is between 1-10 mg/mL.
- Add an excess of TCEP (tris-carboxyethylphosphine) reagent to reduce disulfide bonds, flush with inert gas, and close. 100x molar excess of TCEP is fine. Keep the mixture for 20 minutes at room temperature.
- Dissolve maleimide in DMSO or fresh DMF (1-10 mg in 100 uL).
- Add dye solution to thiol solution (20x fold excess of dye), flush vial with inert gas, and close tightly.
- Mix thoroughly, and keep overnight at room temperature, or 4 Celsius.
- Purify by gel filtration, HPLC, FPLC, or electrophoresis.
For maleimides with poor aqueous solubility, like most dye maleimides, we recommend use of co-solvent (DMF or DMSO). Maleimides with good aqueous solubility (like sulfo-Cy maleimides) can be dissolved in water. If precipitation occurs, increase content of organic co-solvent in the mixture to achieve better labeling.
Dialysis is recommended as a means of purification only for maleimides with good aqueous solubility.
Related products
BDP 558/568 малеимид
Малеимидное производное бордипиррометенового красителя BDP 558/568, флуоресцирующего в желтой области, подходит для модификации тиольных групп в биомолекулах.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| A7480 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| B7480 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| C7480 | 10 mg | $310.00 | в наличии | |
| D7480 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| E7480 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| F7480 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP FL малеимид
Малеимидное производное яркого и фотостабильного бордипиррометенового красителя для флуоресцеинового канала.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 11480 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 21480 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 41480 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 51480 | 50 mg |
$695.00
|
5 д | |
| 61480 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
BDP R6G малеимид
BDP R6G - бордипиррометеновый краситель для канала R6G (родамина 6G). Этот малеимид - функционализированный краситель для модификации тиольных групп в белках и других молекулах.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 14480 | 1 mg | $110.00 | 5 д | |
| 24480 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 44480 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 54480 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 64480 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine3 малеимид
Флуоресцентный краситель Cyanine3 для мечения тиольных групп в белках и пептидах.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 11080 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 21080 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 41080 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 51080 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 61080 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine5.5 малеимид
Малеимидное производное флуорофора Cyanine5.5 - реагент для мечения тиольных (меркаптановых) групп в белках и пептидах.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 17080 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 27080 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 47080 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 57080 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 67080 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine5 малеимид
Производное красителя Cyanine5, предназначенное для мечения тиольных групп, например остатков цистеина в белках и пептидах.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 13080 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 23080 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 43080 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 53080 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 63080 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine7.5 малеимид
Реагент для мечения сульфгидрильных групп инфракрасным флуоресцентным красителем Cyanine7.5.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 16080 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 26080 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 46080 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 56080 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 66080 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Cyanine7 малеимид
Краситель для ближней ИК-области, содержащий малеимидный фрагмент. Реагирует с тиолами, например с остатками цистеина в белках.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 15080 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 25080 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 45080 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 55080 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 65080 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine5 малеимид
Реагент для мечения белков, в том числе антител, красителем sulfo-Cyanine5 по сульфгидрильным группам.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 13380 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 23380 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
| 43380 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
| 53380 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
| 63380 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
sulfo-Cyanine7.5 малеимид
sulfo-Cyanine7.5 - очень гидрофильный краситель для ближнего ИК-диапазона, предназначенный для имэджинга in vivo. Данный малеимид подходит для мечения сульфгидрильных групп в белках и пептидах.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 16380 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 26380 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
| 46380 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
| 56380 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
| 66380 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
Sulfo-Cyanine7 малеимид
Водорастворимый реакционноспособный краситель, содержащий малеимидную группу. Предназначен для мечения белков и пептидов по тиольным группам.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 15380 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 25380 | 5 mg | $290.00 | в наличии | |
| 45380 | 25 mg |
$690.00
|
в наличии | |
| 55380 | 50 mg |
$1270.00
|
в наличии | |
| 65380 | 100 mg |
$1990.00
|
в наличии |
TAMRA малеимид, 6-изомер
TAMRA - хорошо известный ксантеновый флуорофор родаминового ряда. Это производное - малеимид для мечения белков и пептидов по SH-группам цистеина. Чистый 6-изомер.| Артикул | Фасовка | Цена | Срок поставки | Купить товар |
|---|---|---|---|---|
| 18180 | 1 mg | $110.00 | в наличии | |
| 28180 | 5 mg | $210.00 | в наличии | |
| 48180 | 25 mg |
$410.00
|
в наличии | |
| 58180 | 50 mg |
$695.00
|
в наличии | |
| 68180 | 100 mg |
$1190.00
|
в наличии |
Корзина пуста
$ 
