Мечение малеимидами белков и других тиолированных биомолекул

Реакция тиолов с малеимидами широко используется для биоконъюгации и мечения различных биомолекул, включая белки и пептиды. Реакция протекает по следующей схеме:

Thiol maleimide reaction scheme

Малеимиды представляют собой электрофильные соединения, обладающие высокой селективностью по отношению к тиолам. Хотя малеимиды почти никогда не встречаются в природе, тиолы в ней очень распространены. В частности, они содержатся в белках и пептидах в виде остатков цистеина. Природная ДНК не содержит тиолов, однако, синтетические олигонуклеотиды с тиоловыми группами можно легко получить в лабораторных условиях.

Тиолы склонны к окислительной димеризации с образованием дисульфидных связей. Таким образом, остатки цистеина образуют дисульфидные мостики, которые стабилизируют третичные структуры белка. Дисульфиды, в отличие от тиолов, не способны реагировать с малеимидами, поэтому перед началом конъюгации необходимо восстановить дисульфиды и исключить кислород из реакции.

Протокол конъюгации зависит от растворимости исходных компонентов. Для соединений с низкой растворимостью в воде, например, большинства малеимидов флуоресцентных красителей, используют органические сорастворители, такие как ДМСО или ДМФА

Мы рекомендуем следующий протокол для конъюгации малеимидов красителей Lumiprobe с белками, пептидами и другими тиолированными биомолекулами.

  1. Растворите белок или другую молекулу, содержащую тиол и подлежащую мечению, в пластиковом флаконе с дегазированном буфером, pH 7–7,5 (подходят PBS, Tris, HEPES, либо другие буферы, не содержащие тиолы). Буфер можно дегазировать, применяя к нему вакуум в течение нескольких минут или барботируя через инертный газ (азот, аргон или гелий). Для белков обычно используют концентрации от 1 до 10 мг/мл.
  2. Добавьте во флакон избыток TCEP (трис-карбоксиэтилфосфина) для восстановления дисульфидных связей, продуйте смесь инертным газом и закройте флакон. Рекомендуется использовать 100-кратный молярный избыток TCEP. Инкубируйте смесь 20 мин при комнатной температуре.
  3. Растворите малеимид красителя в ДМСО или свежем ДМФА (1–10 мг в 100 мкл).
  4. Добавьте раствор малеимида красителя в раствор тиола (20-кратный избыток красителя), продуйте флакон инертным газом и плотно закройте.
  5. Тщательно перемешайте содержимое флакона и оставьте его на ночь при +4°С или при комнатной температуре.
  6. Очистите меченный продукт гель-фильтрацией, ВЭЖХ, ЖХБР или электрофорезом.

Для малеимидов с плохой растворимостью в воде, как и для большинства малеимидов красителей, мы рекомендуем использовать сорастворитель (ДМФА или ДМСО). Малеимиды с хорошей растворимостью в воде (например, sulfo-Cyanine-малеимиды) можно растворять непосредственно в воде. В случае выпадения осадка необходимо увеличить содержание органического сорастворителя в смеси, чтобы обеспечить лучший результат мечения.

Диализ рекомендуется в качестве средства очистки только для малеимидов с хорошей растворимостью в воде.

Похожие товары

AF 430 малеимид

AF 430 - краситель с эмиссией в желто-зеленой области. Относится к кумаринам. Это малеимидное производное для мечения тиольных групп биомолекул.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
10880 1 mg $140 в наличии
20880 5 mg $450 в наличии
40880 25 mg $1460 в наличии
50880 50 mg $1890 в наличии
60880 100 mg $2640 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

AF 488 малеимид

AF 488 С6 малеимид для мечения флуорофором AF 488 молекул, содержащих тиольную группу.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11880 1 mg $140 в наличии
21880 5 mg $450 в наличии
41880 25 mg $1460 в наличии
51880 50 mg по запросу в наличии
61880 100 mg по запросу в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

BDP 558/568 малеимид

Малеимидное производное бордипиррометенового красителя BDP 558/568, флуоресцирующего в желтой области, подходит для модификации тиольных групп в биомолекулах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
A7480 1 mg $125 в наличии
B7480 5 mg $260 в наличии
C7480 10 mg $325 в наличии
D7480 25 mg $510 в наличии
E7480 50 mg $895 в наличии
F7480 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

BDP 581/591 малеимид

Малеимидное производное BDP 581/591 для конъюгации с тиолами. Флуорофор подходит для различных применений, включая микроскопию и флуоресцентно-поляризационный анализ.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
16480 1 mg $125 в наличии
26480 5 mg $260 в наличии
46480 25 mg $510 в наличии
56480 50 mg $895 в наличии
66480 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

BDP 630/650 малеимид

BDP 630/650 малеимид - краситель, вступающий в реакцию с тиольными группами, и разработан специально для красного канала красителя Cyanine5. Его химическая основа - бордипиррометен
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15480 1 mg $125 в наличии
25480 5 mg $260 в наличии
45480 25 mg $510 в наличии
55480 50 mg $895 в наличии
65480 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

BDP FL малеимид

Малеимидное производное яркого и фотостабильного бордипиррометенового красителя для флуоресцеинового канала.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11480 1 mg $125 в наличии
21480 5 mg $260 в наличии
41480 25 mg $510 в наличии
51480 50 mg $895 в наличии
61480 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

BDP R6G малеимид

BDP R6G - бордипиррометеновый краситель для канала R6G (родамина 6G). Этот малеимид - функционализированный краситель для модификации тиольных групп в белках и других молекулах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
14480 1 mg $125 в наличии
24480 5 mg $260 в наличии
44480 25 mg $510 в наличии
54480 50 mg $895 в наличии
64480 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

BDP TMR малеимид

Яркий краситель для канала TAMRA с малеимидной функциональностью для модификации тиолов. Флуорофор BDP TMR особенно подходит для микроскопии и методов, детектирующих поляризацию флуоресценции.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
12480 1 mg $125 в наличии
22480 5 mg $260 в наличии
42480 25 mg $510 в наличии
52480 50 mg $895 в наличии
62480 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

BDP TR малеимид

BDP TR - универсальный флуорофор, спектры поглощения и эмиссии которого соответствуют красителю ROX. Он пригоден для двухфотонных и поляризационных экспериментов.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13480 1 mg $125 в наличии
23480 5 mg $260 в наличии
43480 25 mg $510 в наличии
53480 50 mg $895 в наличии
63480 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Cyanine3B малеимид

Производное Cyanine3B, модификации красителя Cyanine3 с ещё более высоким квантовым выходом, для проведения тиол-малеимидной реакции.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
19380 1 mg $250 в наличии
29380 5 mg $450 в наличии
49380 25 mg $1750 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Cyanine3 малеимид

Флуоресцентный краситель Cyanine3 для мечения тиольных групп в белках и пептидах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11080 1 mg $125 в наличии
21080 5 mg $260 в наличии
41080 25 mg $510 в наличии
51080 50 mg $895 в наличии
61080 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Cyanine5.5 малеимид

Малеимидное производное флуорофора Cyanine5.5 - реагент для мечения тиольных (меркаптановых) групп в белках и пептидах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17080 1 mg $125 в наличии
27080 5 mg $260 в наличии
47080 25 mg $510 в наличии
57080 50 mg $895 в наличии
67080 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Cyanine5 малеимид

Производное красителя Cyanine5, предназначенное для мечения тиольных групп, например остатков цистеина в белках и пептидах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13080 1 mg $125 в наличии
23080 5 mg $260 в наличии
43080 25 mg $510 в наличии
53080 50 mg $895 в наличии
63080 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Cyanine7.5 малеимид

Реагент для мечения сульфгидрильных групп инфракрасным флуоресцентным красителем Cyanine7.5.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
16080 1 mg $125 в наличии
26080 5 mg $260 в наличии
46080 25 mg $510 в наличии
56080 50 mg $895 в наличии
66080 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Cyanine7 малеимид

Краситель для ближней ИК-области, содержащий малеимидный фрагмент. Реагирует с тиолами, например с остатками цистеина в белках.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15080 1 mg $125 в наличии
25080 5 mg $260 в наличии
45080 25 mg $510 в наличии
55080 50 mg $895 в наличии
65080 100 mg $1490 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

FAM малеимид, 6-изомер

Флуоресцеина (FAM) малеимид это краситель, реакционноспособный по отношению к тиогруппам. Получен из изомерно чистого 6-FAM. Флуоресцеин - это яркий краситель, совместимый со многими приборами и установками для флуоресцентных измерений.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
24180 5 mg –   в наличии
44180 25 mg $260 в наличии
54180 50 mg $370 в наличии
64180 100 mg $525 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

ROX малеимид, 5-изомер

ROX малеимид - производное изомерно чистого флуорофора родамин X, содержащее малеимидный фрагмент для мечения тиольных (сульфгидрильных) групп.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11280 1 mg $110 в наличии
21280 5 mg $165 в наличии
41280 25 mg $285 в наличии
51280 50 mg $495 в наличии
61280 100 mg $880 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

sulfo-Cyanine3 малеимид

Водорастворимый реагент - производное красителя sulfo-Cyanine3 для мечения тиольных групп антител и других белков.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11380 1 mg $115 в наличии
21380 5 mg $290 в наличии
41380 25 mg $695 в наличии
51380 50 mg $1190 в наличии
61380 100 mg $1990 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

sulfo-Cyanine5.5 малеимид

sulfo-Cyanine5.5 - водорастворимый флуоресцентный краситель для дальней красной области. Это производное - малеимид, реагирующий с тиолами. Он рекомендован для мечения чувствительных белков, не совместимых с органическими сорастворителями.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17380 1 mg $125 в наличии
27380 5 mg $325 в наличии
47380 25 mg $790 в наличии
57380 50 mg $1490 в наличии
67380 100 mg $1990 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

sulfo-Cyanine5 малеимид

Реагент для мечения белков, в том числе антител, красителем sulfo-Cyanine5 по сульфгидрильным группам.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13380 1 mg $115 в наличии
23380 5 mg $290 в наличии
43380 25 mg $695 в наличии
53380 50 mg $1270 в наличии
63380 100 mg $1990 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

sulfo-Cyanine7.5 малеимид

sulfo-Cyanine7.5 - очень гидрофильный краситель для ближнего ИК-диапазона, предназначенный для имиджинга in vivo. Данный малеимид подходит для мечения сульфгидрильных групп в белках и пептидах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
16380 1 mg $115 в наличии
26380 5 mg $295 в наличии
46380 25 mg $790 в наличии
56380 50 mg $889 в наличии
66380 100 mg $1385 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

sulfo-Cyanine7 малеимид

Водорастворимый реакционноспособный краситель, содержащий малеимидную группу. Предназначен для мечения белков и пептидов по тиольным группам.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15380 1 mg $115 в наличии
25380 5 mg $295 в наличии
45380 25 mg $790 в наличии
55380 50 mg $1490 в наличии
65380 100 mg $1990 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

TAMRA малеимид, 5-изомер

TAMRA - хорошо известный родаминовый краситель. Он доступен в виде двух изомеров, 5- и 6-. Они обладают почти идентичными свойствами, но требуют разделения. Это производное ТАМРА для мечения тиольных групп.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17180 1 mg $110 в наличии
27180 5 mg $210 в наличии
47180 25 mg $410 в наличии
57180 50 mg $695 в наличии
67180 100 mg $1190 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

TAMRA малеимид, 6-изомер

TAMRA - хорошо известный ксантеновый флуорофор родаминового ряда. Это производное - малеимид для мечения белков и пептидов по SH-группам цистеина. Чистый 6-изомер.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
18180 1 mg $110 в наличии
28180 5 mg $260 в наличии
48180 25 mg $410 в наличии
58180 50 mg $695 в наличии
68180 100 mg $1190 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Биотин X малеимид

Тиол-реактивный бифункциональный линкер для мечения белков, пептидов и других тиолированных молекул биотином.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
2896-25mg 25 mg $225 в наличии
2896-100mg 100 mg $850 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Пирен малеимид

Малеимидное производное пирена для мечения тиолов. Пирен примечателен среди других флуорофоров своей способностью к образованию эксимеров.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13580 1 mg $110 в наличии
23580 5 mg $210 в наличии
43580 25 mg $410 в наличии
53580 50 mg $695 в наличии
63580 100 mg $1190 в наличии
Нашли более выгодное предложение? Сообщите нам и мы предложим выгодные варианты!

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.