Извините, данная страница недоступна на русском языке. Просмотрите, пожалуйста, английскую версию страницы.

Protocol: Maleimide labeling of proteins and other thiolated biomolecules

Reaction of thiols with maleimides is a process which is widely used for bioconjugation and labeling of biomolecules including proteins and peptides. It proceeds according to the following scheme:

Thiol maleimide reaction scheme

Maleimides are electrophilic compounds which show high selectivity towards thiols. While maleimides hardly ever occur in nature, thiols are very abundant. They are encountered in proteins and peptides as cysteine residues. Although natural DNA does not contain thiols, synthetic oligonucleotides with thiol groups can be easily prepared.

Thiols are prone to oxidative dimerization with the formation of disulfide bonds. Cysteine residues thus form disulfide bridges, which stabilize protein tertiary structures. Disulfides do not react with maleimides. Therefore, it is necessary to reduce disulfides prior to the conjugation, and to exclude oxygen from the reaction.

Conjugation protocol depends on the solubility of the starting components. For compounds with low aqueous solubility, like most fluorescent dye maleimides, use of organic co-solvent, such as DMSO or DMF, is essential.

We recommend the following protocol for the conjugation of Lumiprobe dye maleimides with proteins, peptides, and other thiolated biomolecules.

  1. Dissolve the protein or other molecule containing thiol to be labeled in degassed buffer (PBS, Tris, HEPES are good, although others buffers containing no thiols can be used) at pH 7-7.5 in plastic vial. Buffer can be degassed by applying vacuum on it for several minutes, or by bubbling through inert gas (nitrogen, argon, or helium). For proteins, good concentration is between 1-10 mg/mL.
  2. Add an excess of TCEP (tris-carboxyethylphosphine) reagent to reduce disulfide bonds, flush with inert gas, and close. 100x molar excess of TCEP is fine. Keep the mixture for 20 minutes at room temperature.
  3. Dissolve maleimide in DMSO or fresh DMF (1-10 mg in 100 uL).
  4. Add dye solution to thiol solution (20x fold excess of dye), flush vial with inert gas, and close tightly.
  5. Mix thoroughly, and keep overnight at room temperature, or 4 Celsius.
  6. Purify by gel filtration, HPLC, FPLC, or electrophoresis.

For maleimides with poor aqueous solubility, like most dye maleimides, we recommend use of co-solvent (DMF or DMSO). Maleimides with good aqueous solubility (like sulfo-Cy maleimides) can be dissolved in water. If precipitation occurs, increase content of organic co-solvent in the mixture to achieve better labeling.

Dialysis is recommended as a means of purification only for maleimides with good aqueous solubility.

Related products

BDP FL малеимид

Малеимидное производное яркого и фотостабильного бордипиррометенового красителя для флуоресцеинового канала.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11480 1 mg $110.00 в наличии
21480 5 mg $210.00 в наличии
41480 25 mg $410.00 в наличии
51480 50 mg $695.00 в наличии
61480 100 mg $1190.00 в наличии

BDP R6G малеимид

BDP R6G - бордипиррометеновый краситель для канала R6G (родамина 6G). Этот малеимид - функционализированный краситель для модификации тиольных групп в белках и других молекулах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
14480 1 mg $110.00 в наличии
24480 5 mg $210.00 в наличии
44480 25 mg $410.00 в наличии
54480 50 mg $695.00 в наличии
64480 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine3 малеимид

Флуоресцентный краситель Cyanine3 для мечения тиольных групп в белках и пептидах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11080 1 mg $110.00 в наличии
21080 5 mg $210.00 в наличии
41080 25 mg $410.00 в наличии
51080 50 mg $695.00 в наличии
61080 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine5 малеимид

Производное красителя Cyanine5, предназначенное для мечения тиольных групп, например остатков цистеина в белках и пептидах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13080 1 mg $110.00 в наличии
23080 5 mg $210.00 в наличии
43080 25 mg $410.00 в наличии
53080 50 mg $695.00 в наличии
63080 100 mg $1190.00 5 д

Cyanine5.5 малеимид

Малеимидное производное флуорофора Cyanine5.5 - реагент для мечения тиольных (меркаптановых) групп в белках и пептидах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17080 1 mg $110.00 в наличии
27080 5 mg $210.00 в наличии
47080 25 mg $410.00 5 д
57080 50 mg $695.00 в наличии
67080 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine7 малеимид

Краситель для ближней ИК-области, содержащий малеимидный фрагмент. Реагирует с тиолами, например с остатками цистеина в белках.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15080 1 mg $110.00 в наличии
25080 5 mg $210.00 в наличии
45080 25 mg $410.00 в наличии
55080 50 mg $695.00 в наличии
65080 100 mg $1190.00 в наличии

Cyanine7.5 малеимид

Реагент для мечения сульфгидрильных групп инфракрасным флуоресцентным красителем Cyanine7.5.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
16080 1 mg $110.00 в наличии
26080 5 mg $210.00 в наличии
46080 25 mg $410.00 в наличии
56080 50 mg $695.00 в наличии
66080 100 mg $1190.00 в наличии

FAM малеимид, 6-изомер

Флуоресцеина (FAM) малеимид это краситель, реакционноспособный по отношению к тиогруппам. Получен из изомерно чистого 6-FAM. Флуоресцеин - это яркий краситель, совместимый со многими приборами и установками для флуоресцентных измерений.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
44180 25 mg $160.00 в наличии
54180 50 mg $270.00 в наличии
64180 100 mg $420.00 в наличии

Sulfo-Cyanine3 малеимид

Водорастворимый реагент - производное красителя sulfo-Cyanine3 - для мечения тиольных групп антител и других белков.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
11380 1 mg $110.00 в наличии
21380 5 mg $290.00 в наличии
41380 25 mg $690.00 в наличии
51380 50 mg $1270.00 в наличии
61380 100 mg $1990.00 в наличии

Sulfo-Cyanine5 малеимид

Реагент для мечения белков, в том числе антител, красителем sulfo-Cyanine5 по сульфгидрильным группам.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13380 1 mg $110.00 в наличии
23380 5 mg $290.00 в наличии
43380 25 mg $690.00 в наличии
53380 50 mg $1270.00 в наличии
63380 100 mg $1990.00 в наличии

Sulfo-Cyanine5.5 малеимид

Sulfo-Cyanine5.5 - водорастворимый флуоресцентный краситель для дальней красной области. Это производное - малеимид, реагирующий с тиолами. Он рекомендован для мечения чувствительных белков, не совместимых с органическими сорастворителями.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
17380 1 mg $110.00 в наличии
27380 5 mg $290.00 в наличии
47380 25 mg $690.00 в наличии
57380 50 mg $1270.00 в наличии
67380 100 mg $1990.00 в наличии

Sulfo-Cyanine7 малеимид

Водорастворимый реакционноспособный краситель, содержащий малеимидную группу. Предназначен для мечения белков и пептидов по тиольным группам.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
15380 1 mg $110.00 5 д
25380 5 mg $290.00 5 д
45380 25 mg $690.00 в наличии
55380 50 mg $1270.00 в наличии
65380 100 mg $1990.00 в наличии

sulfo-Cyanine7.5 малеимид

sulfo-Cyanine7.5 - очень гидрофильный краситель для ближнего ИК-диапазона, предназначенный для имэджинга in vivo. Данный малеимид подходит для мечения сульфгидрильных групп в белках и пептидах.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
16380 1 mg $110.00 в наличии
26380 5 mg $290.00 в наличии
46380 25 mg $690.00 в наличии
56380 50 mg $1270.00 в наличии
66380 100 mg $1990.00 в наличии

TAMRA малеимид, 6-изомер

TAMRA - хорошо известный ксантеновый флуорофор родаминового ряда. Это производное - малеимид для мечения белков и пептидов по SH-группам цистеина. Чистый 6-изомер.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
18180 1 mg $110.00 в наличии
28180 5 mg $210.00 в наличии
48180 25 mg $410.00 в наличии
58180 50 mg $695.00 в наличии
68180 100 mg $1190.00 в наличии

Пирен малеимид

Малеимидное производное пирена для мечения тиолов. Пирен примечателен среди других флуорофоров своей способностью к образованию эксимеров.
Показать цены
Артикул Фасовка Цена Срок поставки
13580 1 mg $110.00 в наличии
23580 5 mg $210.00 в наличии
43580 25 mg $410.00 в наличии
53580 50 mg $695.00 в наличии
63580 100 mg $1190.00 в наличии

Товар добавлен. Просмотрите корзину покупок или оформите заказ
Введено некорректное число товаров для добавления.